2) глюкозооксидазным
3) ортотолуидиновым
4) редуктометрическим
Наиболее точные результаты определения глюкозы получают гексокиназным методом, который рассматривается как референтный ферментативный подход в клинической лабораторной диагностике. На первом этапе гексокиназа катализирует фосфорилирование глюкозы с образованием глюкозо-6-фосфата. Затем глюкозо-6-фосфат окисляется под действием глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, а количество образовавшегося восстановленного кофермента NAD(P)H измеряют фотометрически при длине волны около 340 нм. Оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.
Высокая аналитическая специфичность метода обусловлена последовательностью ферментативных реакций и измерением продукта, тесно связанного именно с метаболизмом глюкозы. Благодаря этому влияние других восстанавливающих веществ и компонентов биологического материала минимально, а результаты хорошо воспроизводимы и сопоставимы с референтными значениями. Глюкозооксидазный метод также основан на ферментативной реакции, однако на результат могут влиять содержание кислорода, аскорбат, мочевая кислота, билирубин и другие вещества в зависимости от применяемой аналитической системы.
Ортотолуидиновый и редуктометрический методы уступают гексокиназному по специфичности: они реагируют не только с глюкозой, но и с рядом других углеводов или восстановителей. Поэтому такие подходы имеют преимущественно историческое значение и не соответствуют современным требованиям к стандартизованному лабораторному измерению гликемии. В клинической практике диагностическую оценку проводят по концентрации глюкозы в венозной плазме с обязательным учетом подготовки пациента и условий хранения образца.
| Метод | Принцип определения | Специфичность | Основные ограничения | Современная оценка |
|---|---|---|---|---|
| Гексокиназный | Фосфорилирование глюкозы с последующим образованием NAD(P)H и фотометрией | Высокая | Требует стандартизованных реагентов и корректного выполнения ферментативной реакции | Референтный и предпочтительный метод |
| Глюкозооксидазный | Окисление глюкозы до глюконовой кислоты с образованием перекиси водорода | Высокая, но зависит от системы | Влияние кислорода, аскорбиновой кислоты, билирубина и других интерферентов | Широко применяется, но обычно не считается наиболее точным референтным подходом |
| Ортотолуидиновый | Цветная реакция альдегидной группы углеводов с ортотолуидином в кислой среде | Недостаточная | Реакция с другими альдегидсодержащими углеводами; токсичность реагента | Устаревший метод |
| Редуктометрический | Восстановление солей металлов редуцирующими веществами | Низкая | Определяются глюкоза и другие восстановители, что снижает селективность | Не подходит для точной специфичной оценки гликемии |
| Преаналитический контроль | Своевременное отделение плазмы или подавление гликолиза после взятия крови | Критически важен для любого метода | Задержка обработки приводит к снижению концентрации глюкозы в образце | Обязательное условие достоверного результата |
Гексокиназный метод обеспечивает наилучшее сочетание специфичности, точности и воспроизводимости. Результат необходимо интерпретировать с учетом типа биоматериала: диагностические критерии сахарного диабета стандартизованы преимущественно для венозной плазмы. Существенное значение имеют соблюдение условий натощак, правильный забор крови и быстрое предотвращение внутриклеточного гликолиза. Поэтому достоверность исследования определяется не только выбранной методикой, но и всей преаналитической и аналитической цепочкой.