2) инактивация факторов V и VIII
3) связывание Са2+ (+)
4) активация взаимодействия тромбин-антитромбин
Правильный ответ — связывание ионов Ca2+. Этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) является сильным хелатором кальция: он образует с ним прочный комплекс и резко снижает концентрацию ионизированного кальция в образце. Кальций относится к фактору IV свертывания и необходим для формирования теназного и протромбиназного комплексов на фосфолипидной поверхности, генерации тромбина и последующего образования фибрина.
При исследовании плазменного гемостаза обычно применяют цитрат натрия, связывающий кальций обратимо. В реакционной смеси избыток кальция добавляют повторно, что позволяет стандартизированно запустить свертывание и определить протромбиновое время, АЧТВ, концентрацию фибриногена и другие показатели. Комплекс ЭДТА с кальцием значительно более устойчив, поэтому его присутствие приводит к неконтролируемому подавлению каскада коагуляции и недостоверному, как правило резко удлиненному, результату; это не является истинным отражением состояния системы гемостаза.
Инактивация факторов V и VIII не является основным принципом действия ЭДТА в данной ситуации, а активация комплекса тромбин–антитромбин характерна преимущественно для гепарина. Нарушение полимеризации фибрин-мономеров также не объясняет применение ЭДТА как антикоагулянта для коагулологических исследований. Поэтому кровь, случайно взятую в пробирку с ЭДТА, для таких анализов необходимо заменить образцом, собранным с цитратом натрия.
| Антикоагулянт | Основной механизм | Допустимое или типичное применение | Причина ограничений при исследовании плазменного гемостаза |
|---|---|---|---|
| Цитрат натрия 3,2% | Обратимо связывает Ca2+ | ПВ/МНО, АЧТВ, фибриноген, другие коагулологические тесты | Связывание преодолевается добавлением кальция; требуется соотношение кровь:антикоагулянт 9:1 |
| ЭДТА | Образует прочный хелатный комплекс с Ca2+ | Общий анализ крови, подсчет клеток крови, часть молекулярных исследований | Глубоко подавляет кальций-зависимую генерацию тромбина и делает коагулологические результаты недостоверными |
| Оксалат | Связывает или осаждает кальций в виде нерастворимого соединения | Отдельные биохимические и исторически применявшиеся лабораторные методики | Нарушает кальций-зависимые реакции и может изменять активность клеточных и плазменных компонентов |
| Гепарин | Усиливает действие антитромбина на тромбин и фактор Xa | Исследования анти-Xa, некоторые специализированные тесты, газовый состав крови | Остаточный гепарин непосредственно влияет на коагуляционный каскад и искажает стандартные ПВ и АЧТВ |
| Гирудин | Прямо ингибирует тромбин | Специализированные исследования, в том числе при особых требованиях к образцу | Блокирует конечный фермент каскада и не позволяет стандартно оценивать образование тромбина |
Качество коагулологических результатов зависит не только от выбора антикоагулянта, но и от правильного заполнения пробирки, тщательного перемешивания и своевременного получения плазмы. При гематокрите более 55% объем цитрата корректируют, поскольку избыток антикоагулянта относительно плазмы может дополнительно исказить результаты. Образец с ЭДТА нельзя использовать даже при попытке последующей рекальцификации: требуется повторный забор крови в цитратную пробирку. Выявленное таким образом удлинение коагуляционных тестов следует расценивать как преаналитическую ошибку, а не как диагностический признак коагулопатии.