2) 12 часов
3) 24 часов (+)
4) 7 дней
Правильный ответ — 24 часа. Для исходного биологического материала, предназначенного для ПЦР-исследования, хранение при 2–8 °C допустимо в течение ограниченного времени, поскольку охлаждение замедляет активность нуклеаз и размножение сопутствующей микрофлоры, но не прекращает их полностью. За этот период проба сохраняет приемлемую стабильность для выделения ДНК или РНК и последующей амплификации целевой последовательности.
При более длительном хранении возрастает риск деградации нуклеиновых кислот, лизиса клеток, изменения концентрации возбудителя и накопления веществ-ингибиторов полимеразной реакции. Особенно чувствительна РНК, поэтому нарушение сроков и температурного режима может привести к ложноотрицательному результату или невозможности получения валидного результата. Конкретные требования могут уточняться инструкцией к набору реагентов и видом материала, однако для первичной пробы общим нормативным ориентиром является срок не более 24 часов при 2–8 °C.
| Ситуация | Рекомендуемый режим | Значение для результата ПЦР |
|---|---|---|
| Кратковременное хранение нативного биоматериала до исследования | 2–8 °C, не более 24 часов | Сохраняется приемлемая стабильность ДНК/РНК при соблюдении холодовой цепи |
| Доставка материала в лабораторию | Транспортирование в охлажденном состоянии с фиксацией времени взятия | Снижается скорость деградации мишени и размножения посторонней микрофлоры |
| Задержка исследования свыше 24 часов | Замораживание согласно валидированной методике, обычно при −20 °C или ниже | Позволяет ограничить разрушение нуклеиновых кислот, но режим зависит от типа материала и мишени |
| Материал, содержащий РНК | Для длительного хранения предпочтительно −70…−80 °C либо стабилизирующая транспортная среда | Предотвращается быстрое действие РНКаз и повышается вероятность выявления РНК-мишени |
| Выделенная ДНК | Кратковременно — 2–8 °C, длительно — замораживание по инструкции к набору | Очищенная ДНК обычно стабильнее исходного материала, но также подвержена деградации и контаминации |
| Многократное замораживание и размораживание | Не допускается; образец разделяют на аликвоты | Снижается целостность нуклеиновых кислот и воспроизводимость количественных результатов |
| Нарушение температурного режима или использование неподходящей пробирки | Материал оценивают по критериям приемлемости лабораторной методики | Возможны ингибирование амплификации, деградация мишени и получение ложноотрицательного либо невалидного результата |
Срок 24 часа относится прежде всего к нативному биологическому материалу до его обработки и выделения нуклеиновых кислот. Соблюдение холодовой цепи является обязательной частью преаналитического этапа ПЦР-диагностики. При поступлении образца необходимо учитывать вид материала, транспортную среду, время взятия и фактические условия хранения. Если эти параметры нарушены, лаборатория вправе отклонить пробу или указать на риск недостоверного результата.