2) белки
3) микроэлементы
4) РНК (+)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) предназначена для выявления и амплификации определённых участков нуклеиновых кислот. Если исследуемым материалом является РНК, перед этапом амплификации выполняют обратную транскрипцию — синтез комплементарной ДНК (кДНК) с помощью фермента обратной транскриптазы. Такой вариант называется ОТ-ПЦР (RT-PCR), а при использовании флуоресцентной регистрации накопления продукта — количественной ПЦР в реальном времени (RT-qPCR).
Результат исследования определяется специфичностью праймеров и зондов, комплементарных целевому участку генома или транскрипта. При наличии искомой РНК образуется амплифицированный фрагмент, который выявляется по флуоресценции, электрофоретической полосе или иному сигналу; при количественном анализе рассчитывается вирусная или иная нуклеиновокислотная нагрузка. Поэтому РНК является корректным объектом молекулярно-генетического исследования методом ПЦР с этапом обратной транскрипции.
| Исследуемый объект | Метод, применяемый преимущественно | Что выявляется или измеряется |
|---|---|---|
| РНК вирусов и микроорганизмов | ОТ-ПЦР, RT-qPCR | Специфическая последовательность РНК после обратной транскрипции; результат может быть качественным или количественным |
| ДНК микроорганизмов и генетические мишени | ПЦР, real-time ПЦР | Наличие или количество определённого участка ДНК |
| Белки | Иммуноферментный анализ, иммунохемилюминесцентный анализ, масс-спектрометрия | Концентрация белка на основании иммунореактивности или физико-химических характеристик |
| Гормоны | Иммунохимические методы, жидкостная хроматография — масс-спектрометрия | Содержание гормона или его метаболита в биологическом образце |
| Микроэлементы | Атомно-абсорбционная спектрометрия, ICP-MS | Концентрация химического элемента в биоматериале |
| Экспрессия гена | ОТ-ПЦР в режиме реального времени | Количество соответствующей матричной РНК как показатель транскрипционной активности |
ПЦР не определяет гормоны, белки или микроэлементы как химические вещества непосредственно, поскольку они не являются матрицами для ферментативной амплификации. Для их анализа применяют иммунологические, хроматографические или спектрометрические технологии. В диагностике РНК-содержащих вирусов ОТ-ПЦР позволяет подтвердить присутствие возбудителя даже при низкой концентрации нуклеиновой кислоты. Интерпретация результата должна учитывать качество образца, контроль выделения и наличие внутренних и отрицательных контролей реакции.