2) микроэлементы
3) белки
4) ДНК (+)
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) предназначена для многократного копирования определённого участка нуклеиновой кислоты. Специфичность обеспечивается двумя праймерами — короткими олигонуклеотидами, комплементарными фланкирующим последовательностям целевого фрагмента. В каждом цикле происходят денатурация двухцепочечной ДНК, отжиг праймеров и синтез новых цепей термостабильной ДНК-полимеразой, благодаря чему количество амплифицированного фрагмента возрастает экспоненциально.
Поэтому правильным является ответ ДНК : именно она служит матрицей для направленного синтеза копий заданной последовательности. Белки, углеводы и микроэлементы не содержат нуклеотидной последовательности, распознаваемой праймерами, и не могут быть непосредственно амплифицированы ПЦР. Если исследуемым материалом служит РНК, перед амплификацией выполняют обратную транскрипцию с образованием комплементарной ДНК (кДНК); такой вариант называется ОТ-ПЦР или RT-PCR.
| Исследуемый объект | Возможность амплификации | Принцип или подход |
|---|---|---|
| Геномная ДНК человека | Да | Прямая амплификация выбранного участка с использованием специфических праймеров |
| ДНК бактерий, вирусов или грибов | Да | Выявление видо- или родоспецифического генетического маркера |
| Плазмидная или рекомбинантная ДНК | Да | Копирование вставки, регуляторной области или другого заданного фрагмента |
| РНК | Не напрямую | Сначала синтезируют кДНК методом обратной транскрипции, затем проводят ПЦР |
| Белки | Нет | Определяются иммунологическими, электрофоретическими или масс-спектрометрическими методами |
| Углеводы и микроэлементы | Нет | Исследуются химическими, ферментативными, спектрометрическими и хроматографическими методами |
В диагностике результат ПЦР оценивают по наличию специфического ампликона, а в количественных форматах — по значению порогового цикла и рассчитанной концентрации мишени. Аналитическая специфичность зависит от последовательности праймеров и зондов, а чувствительность — в том числе от качества выделения нуклеиновой кислоты и отсутствия ингибиторов реакции. Для подтверждения достоверности постановки используют отрицательные и положительные контроли. Обнаружение ДНК не всегда означает наличие жизнеспособного микроорганизма, поскольку метод выявляет генетический материал независимо от его биологической активности.