2) рекомбинантные белки и пептиды, имитирующие последовательности вируса (+)
3) поверхностный антиген вируса гепатита В
4) индивидуальные белки, полученные при фракционировании культивированного вируса
В коммерческих иммунологических тест-системах для выявления антител к вирусу гепатита C применяют рекомбинантные вирусные белки и синтетические пептиды, соответствующие иммунологически значимым участкам генома HCV. Обычно в состав антигенной панели включают фрагменты структурного белка Core и неструктурных белков NS3, NS4 и NS5. Такие антигены фиксируют на твёрдой фазе; при наличии в образце специфических anti-HCV они связываются с антигеном, а образовавшийся иммунный комплекс выявляется ферментативной, хемилюминесцентной или другой меткой.
Рекомбинантная технология позволяет получать стандартизированные антигены с высокой воспроизводимостью, контролируемой чистотой и заданной антигенной специфичностью. Использование цельного вируса, выращенного в клеточной культуре, практически неприемлемо из-за сложностей культивирования HCV, низкой эффективности его репликации, неоднородности вирусного материала и повышенных требований биологической безопасности. Индивидуальные белки, выделенные фракционированием культивированного вируса, также не обеспечивают необходимой стандартизации и стабильности производства.
Принцип метода основан на серологическом обнаружении иммунного ответа, а не самого возбудителя. Положительный результат на anti-HCV свидетельствует о текущем или перенесённом инфицировании, но не позволяет самостоятельно подтвердить наличие активной вирусной репликации; для этого используют выявление РНК HCV методом ПЦР. Поэтому сочетание рекомбинантных белков и синтетических пептидов повышает чувствительность теста к антителам, направленным против различных антигенных участков вируса.
| Антигенный компонент или подход | Источник и характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Core | Рекомбинантный фрагмент структурного ядерного белка HCV | Содержит иммунодоминантные эпитопы и способствует выявлению антител к консервативным участкам вируса |
| NS3 | Рекомбинантный фрагмент неструктурного белка, обладающего протеазной и геликазной активностью | Повышает чувствительность серологического теста за счёт выявления антител к ранним и выраженным иммунным ответам |
| NS4 | Рекомбинантные белки или синтетические пептиды соответствующих участков вируса | Расширяет спектр выявляемых антител и помогает учитывать различия антигенной структуры HCV |
| NS5 | Фрагменты неструктурного белка, связанного с репликацией вирусной РНК | Дополняет антигенную панель и повышает вероятность обнаружения антител при разных вариантах течения инфекции |
| Синтетические пептиды | Искусственно синтезированные последовательности, имитирующие эпитопы вирусных белков | Обеспечивают точный состав, высокую воспроизводимость и снижение неспецифических реакций |
| Цельный культивированный вирус | Вирусный препарат, полученный при размножении HCV в клеточной культуре | Не используется как стандартный антиген коммерческих тестов из-за трудностей культивирования, вариабельности и требований биобезопасности |
| Подтверждение активной инфекции | Молекулярное выявление РНК HCV в крови | Позволяет отличить текущую репликацию вируса от перенесённой инфекции или ложноположительного серологического результата |
Серологическое тестирование на anti-HCV применяется прежде всего для первичного скрининга и отбора образцов для дальнейшего обследования. Реактивный результат требует подтверждения дополнительным исследованием, оптимально количественной или качественной ПЦР на РНК HCV. Отрицательный результат не исключает инфекцию в период серонегативного окна или при выраженном иммунодефиците. Именно поэтому стандартизированные рекомбинантные антигены и синтетические пептиды являются основой современных коммерческих тест-систем.