2) исчезновения окраски при обработке полоски реактивом Марки
3) появления окраски при взаимодействии меченных антигенов и антител (+)
4) взаимодействия с реактивом FPN, которым пропитана тест-полоска
Основой предварительных исследований с тест-полосками на наркотические средства и психотропные вещества является иммунохроматографический метод. В зоне конъюгата находятся антитела или антигенные конъюгаты, меченные коллоидным золотом, окрашенными латексными частицами либо другим визуализируемым маркером. При прохождении исследуемой пробы по мембране происходят специфическое связывание антигена с антителом и миграция образовавшихся иммунных комплексов; накопление метки формирует видимую окраску диагностической зоны.
Для большинства экспресс-тестов на наркотики используется конкурентный вариант иммуноанализа: вещество из образца конкурирует с меченым аналогом наркотика за ограниченное количество антител. Поэтому интерпретация окраски может быть обратной: при отрицательной пробе появляется тестовая полоска, а при концентрации вещества выше порогового значения тестовая линия ослабевает или исчезает; контрольная линия должна сохраняться. Реакции Марки, Триндлера и FPN относятся к химическим цветным реакциям и не определяют принцип действия иммунологических тест-полосок.
| Элемент или признак | Механизм и диагностическое значение |
|---|---|
| Исследуемая проба | Моча, слюна или иной биологический материал перемещается по мембране за счёт капиллярных сил и доставляет возможный анализируемый антиген к зонам теста. |
| Меченый иммунореагент | Антитела либо антигенный конъюгат связаны с визуальным маркером; их распределение после иммунного взаимодействия обеспечивает формирование окрашенного сигнала. |
| Специфичность реакции | Антитело распознаёт определённую химическую структуру вещества или его метаболита, что позволяет проводить ориентировочный скрининг отдельных классов соединений. |
| Конкурентная схема | Аналит из образца конкурирует с меченым антигеном за антитела; увеличение концентрации вещества обычно приводит к уменьшению окраски тестовой зоны. |
| Контрольная линия | Подтверждает правильное прохождение пробы, достаточность миграции и функциональность реагентов. Её отсутствие делает результат недействительным. |
| Пороговое значение | Результат оценивается относительно установленного cut-off; тест показывает наличие вещества или метаболита выше порога, но не определяет их точную концентрацию. |
| Статус результата | Положительный результат является предварительным и требует подтверждения специфичным методом, например газовой или жидкостной хроматографией с масс-спектрометрией. |
Иммунохроматографический скрининг удобен для быстрого выявления вероятного присутствия психоактивных веществ, однако его результат зависит от перекрёстной реактивности антител, концентрации и стабильности аналита, особенностей образца и соблюдения инструкции. Ложноотрицательные результаты возможны при концентрации ниже порога обнаружения или разбавлении материала, а ложноположительные — при взаимодействии антител с родственными соединениями и некоторыми лекарственными препаратами. Окончательное экспертное заключение о наличии конкретного вещества основывается на подтверждающем хроматографическом исследовании с масс-спектрометрической идентификацией.