2) иммуноферментного анализа
3) амплификации нуклеиновых кислот (+)
4) иммунохемилюминесценции
РНК SARS-CoV-2 выявляют методами амплификации нуклеиновых кислот, прежде всего методом обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР, RT-PCR). На первом этапе вирусная РНК преобразуется в комплементарную ДНК, затем специфический участок генома многократно копируется. Накопление ампликона регистрируется по флуоресцентному сигналу, что обеспечивает высокую аналитическую чувствительность и специфичность исследования.
Материалом обычно служит мазок из носоглотки и/или ротоглотки, а при поражении нижних дыхательных путей — соответствующий респираторный биоматериал. Обнаружение специфической РНК свидетельствует о наличии генетического материала вируса в исследованном образце и является лабораторным подтверждением инфекции при интерпретации совместно с клиническими и эпидемиологическими данными. Отрицательный результат не исключает COVID-19 при неправильном взятии материала, недостаточной вирусной нагрузке или исследовании на ранней либо поздней стадии заболевания.
Иммунохроматографические тесты, иммуноферментные и иммунохемилюминесцентные методы непосредственно РНК не амплифицируют: они выявляют вирусный антиген либо антитела к SARS-CoV-2. Антитела отражают иммунный ответ и могут отсутствовать в первые дни болезни, поэтому серологические исследования не заменяют молекулярную диагностику острой инфекции. Быстрые антигенные тесты удобны для скрининга, но обычно уступают RT-PCR по чувствительности и требуют подтверждения при отрицательном результате у пациента с высокой вероятностью COVID-19.
| Метод | Определяемая мишень | Типичный материал | Основная диагностическая роль |
|---|---|---|---|
| ОТ-ПЦР (RT-PCR) | Специфические участки РНК SARS-CoV-2 после обратной транскрипции | Мазок из дыхательных путей, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж | Основной высокочувствительный метод подтверждения текущей инфекции |
| Изотермическая амплификация нуклеиновых кислот | РНК вируса после преобразования в ДНК или непосредственно в процессе реакции | Респираторный биоматериал | Ускоренная молекулярная диагностика при наличии валидированной тест-системы |
| Иммунохроматографический антигенный тест | Белковые антигены вируса | Мазок из носа или носоглотки | Быстрый скрининг; отрицательный результат менее надежен при низкой вирусной нагрузке |
| Иммуноферментный анализ на антиген | Вирусные белки | Респираторный материал | Выявление антигена, но не генома; диагностическая ценность зависит от чувствительности теста |
| Иммуноферментный анализ на антитела | IgM, IgG и/или суммарные антитела к вирусу | Сыворотка или плазма крови | Оценка сформированного иммунного ответа и поздних стадий инфекции |
| Иммунохемилюминесцентный анализ | Чаще антитела, реже антиген — в зависимости от набора | Сыворотка или плазма крови | Автоматизированное серологическое или антигенное исследование; РНК не выявляет |
| Культивирование вируса | Репликационно-компетентный инфекционный вирус | Респираторный биоматериал | Специализированное исследование, не используемое как рутинный способ диагностики |
Для повышения достоверности важны правильный выбор биоматериала, соблюдение техники взятия и своевременная доставка образца в лабораторию. Количественные показатели амплификации, включая значение Ct, интерпретируют только в контексте конкретной тест-системы и клинической ситуации. Само обнаружение РНК не позволяет однозначно судить о жизнеспособности вируса и заразности пациента. При сохраняющемся клиническом подозрении после отрицательного результата целесообразны повторное исследование или применение материала из нижних дыхательных путей по показаниям.