2) антигена, антитела и комплемента
3) растворимого антигена и антитела
4) фиксированного антигена и антитела
Иммуногистохимические методы основаны на специфическом связывании антитела с антигеном, локализованным в клетках или внеклеточном матриксе тканевого среза. Антиген предварительно фиксируют в структуре материала, а антитело несёт метку или выявляется меченой системой второго порядка. В качестве метки используют ферменты, флуорохромы, коллоидное золото и другие детектируемые компоненты; результатом является визуализация окрашивания в определённой клеточной или тканевой локализации.
Поэтому верным является вариант, указывающий на взаимодействие фиксированного антигена с меченым антителом. При прямом методе метку имеет первичное антитело, при непрямом — вторичное антитело, связывающее первичное; оба подхода сохраняют общий принцип иммуногистохимического обнаружения. Фиксация необходима для сохранения морфологии и пространственного распределения антигена, однако может маскировать эпитопы, поэтому применяют демаскировку антигенов, например тепловую или ферментативную.
| Метод | Исследуемый объект | Основной принцип | Способ регистрации | Типичный результат |
|---|---|---|---|---|
| Прямая иммуногистохимия | Антиген в фиксированном тканевом срезе | Меченое первичное антитело непосредственно связывается с антигеном | Ферментная или флуоресцентная метка | Локализованное окрашивание клеток или структур ткани |
| Непрямая иммуногистохимия | Антиген в фиксированной ткани | Первичное антитело связывает антиген, меченое вторичное антитело — первичное | Хромогенная или флуоресцентная реакция | Более высокая чувствительность за счёт усиления сигнала |
| Иммунофлуоресценция | Антигены в тканях или клетках | Специфическое антитело конъюгировано с флуорохромом | Свечение при микроскопии в определённом спектре | Выявление иммунных депозитов, аутоантител и клеточных маркеров |
| Иммуноферментный анализ | Чаще растворимый антиген или антитело | Иммунный комплекс формируется в лунке планшета | Ферментативное изменение окраски раствора | Количественная или полуколичественная оценка аналита |
| Иммунопреципитация | Растворимый антиген | Комплекс антиген–антитело выпадает в осадок или выделяется сорбентом | Оценка осадка либо последующий анализ выделенного белка | Подтверждение наличия и изучение свойств растворимого антигена |
| Реакция связывания комплемента | Растворимый антиген и антитело в присутствии комплемента | Иммунный комплекс фиксирует комплемент | Регистрация потребления комплемента по индикаторной системе | Серологическая оценка антител или антигенов, а не тканевой локализации |
Диагностическая ценность иммуногистохимии определяется не только фактом окрашивания, но и его локализацией, интенсивностью и соответствием морфологической картине. Панели антител позволяют устанавливать клеточную дифференцировку, определять прогностические маркеры и выбирать таргетную терапию. Интерпретация должна учитывать контрольные препараты, фон окрашивания, сохранность ткани и возможное неспецифическое связывание антител.