2) иммуноферментный анализ и иммунохимический анализ (+)
3) полимеразную цепную реакцию нуклеиновых кислот
4) иммуноэлектрофорез и иммуноферментный анализ
Основу определения большинства сывороточных и плазменных онкомаркеров составляют иммунологические методы, основанные на специфическом взаимодействии антитела с антигеном. Искомыми веществами могут быть опухолевые антигены, гликопротеины, гормоны, ферменты и другие белковые молекулы. Иммуноферментный анализ (ИФА) использует антитело или антиген, меченный ферментом: после образования иммунного комплекса фермент вызывает окрашенную реакцию, интенсивность которой пропорциональна концентрации маркера и оценивается фотометрически.
Иммунохимические методы в клинической лаборатории включают также автоматизированные хемилюминесцентные и электрохемилюминесцентные анализы. Они обеспечивают высокую аналитическую чувствительность, специфичность, воспроизводимость и возможность количественного определения широкого спектра маркеров, например ПСА, РЭА, АФП, СА 19-9, СА 125 и β-ХГЧ. Поэтому сочетание ИФА и иммунохимического анализа отражает основные рутинные подходы к исследованию белковых онкомаркеров в крови.
Реакции агглютинации имеют более ограниченное применение и обычно уступают современным иммунным анализаторам по чувствительности и количественной стандартизации. Полимеразная цепная реакция выявляет нуклеиновые кислоты, мутации или специфические транскрипты, а не классические белковые онкомаркеры; иммуноэлектрофорез предназначен преимущественно для разделения и характеристики белков, например при парапротеинемиях, но не является основным универсальным методом определения онкомаркеров.
| Метод | Что выявляет | Принцип регистрации | Основное диагностическое значение | Ограничения |
|---|---|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Антигены, гормоны, гликопротеины и другие белковые маркеры | Ферментная метка вызывает цветную реакцию; оптическая плотность связана с концентрацией аналита | Количественное определение онкомаркеров в сыворотке или плазме | Зависит от качества калибраторов, антител и соблюдения преаналитических требований |
| Хемилюминесцентный иммуноанализ | Белковые и гормональные опухолевые маркеры | Иммунный комплекс формирует световой сигнал, измеряемый автоматическим анализатором | Высокопроизводительное и чувствительное рутинное исследование | Возможны интерференции, гетерофильные антитела и различия между тест-системами |
| Электрохемилюминесцентный анализ | Те же классы молекулярных мишеней, что и при других иммунных методах | Световой сигнал возникает при электрохимической активации метки | Широкий динамический диапазон и автоматизированная количественная оценка | Результаты разных платформ не всегда взаимозаменяемы |
| Реакция агглютинации | Крупные антигенные частицы или частицы-носители с антителами | Видимое или инструментально регистрируемое склеивание частиц | Ограниченные качественные и полуколичественные тесты | Меньшая чувствительность и точность по сравнению с современными иммуноанализами |
| Полимеразная цепная реакция | ДНК, РНК, мутации, транслокированные или опухолевые транскрипты | Амплификация специфического участка нуклеиновой кислоты | Молекулярная диагностика опухоли и выявление генетических нарушений | Не определяет большинство циркулирующих белковых онкомаркеров |
| Иммуноэлектрофорез | Фракции белков и иммуноглобулинов | Электрофоретическое разделение с последующей иммунной преципитацией | Характеристика моноклональных белков и парапротеинов | Не является основным универсальным методом количественного определения онкомаркеров |
Повышение концентрации онкомаркера само по себе не подтверждает наличие злокачественной опухоли, поскольку возможно при доброкачественных заболеваниях, воспалении и физиологических состояниях. Интерпретация проводится с учетом клинической картины, данных визуализации, анамнеза и референсных интервалов конкретной тест-системы. Наиболее важна динамика показателя при наблюдении за эффективностью лечения и ранним выявлением рецидива. Для сопоставимости результатов контрольные исследования желательно выполнять одним методом и в одной лаборатории.