2) определения карбоксигемоглобина
3) определения содержания количества железа в молекуле Нb
4) газометрический — по насыщению крови газом (СО, О2)
Гемиглобинцианидный метод (метод Драбкина) считается классическим референтным способом определения концентрации гемоглобина. Под действием феррицианида гемоглобин различных форм окисляется до метгемоглобина, а затем в присутствии цианида превращается в устойчивый окрашенный комплекс — гемиглобинцианид. Интенсивность его оптического поглощения при длине волны около 540 нм прямо пропорциональна содержанию гемоглобина в образце, что позволяет выполнить точную фотометрическую оценку по калибровочному стандарту.
Преимуществами метода являются высокая воспроизводимость, стандартизованность, относительная простота и возможность учитывать суммарное количество гемоглобина независимо от соотношения оксигемоглобина и дезоксигемоглобина. Результат может искажаться при выраженной липемии, гиперлейкоцитозе, наличии мутности образца и значительного количества сульфгемоглобина, поэтому необходимы холостая проба, контроль качества и соблюдение условий гемолиза. В современных гематологических анализаторах широко применяются автоматизированные фотометрические варианты, однако их оценка также основана на измерении оптического сигнала после лизиса эритроцитов.
Определение карбоксигемоглобина предназначено главным образом для диагностики интоксикации угарным газом и характеризует долю гемоглобина, связанную с CO, а не его общее содержание. Измерение железа дает лишь косвенную оценку, поскольку зависит от содержания железа в других биологических фракциях и от предположения о постоянном количестве железа в молекуле гемоглобина. Газометрия оценивает парциальное давление газов, насыщение и газообмен, но не заменяет прямое определение концентрации гемоглобина.
| Подход | Что определяется | Основной принцип | Диагностическая ценность и ограничения |
|---|---|---|---|
| Гемиглобинцианидный метод | Общая концентрация гемоглобина | Перевод гемоглобина в стабильный окрашенный комплекс с последующей фотометрией при 540 нм | Референтный, точный и воспроизводимый метод; возможна интерференция сульфгемоглобина, липемии и выраженной мутности |
| Автоматическое фотометрическое определение | Концентрация гемоглобина в составе общего анализа крови | Лизис эритроцитов и измерение оптической плотности гемолизата, часто без использования цианида | Основной вариант современной лабораторной практики; требует регулярной калибровки и внутреннего контроля качества |
| Определение карбоксигемоглобина | Фракция гемоглобина, связанная с угарным газом | Измерение спектральных характеристик COHb, обычно методом кооксиметрии | Критично при подозрении на отравление CO, но не отражает общее количество гемоглобина |
| Определение железа | Содержание железа в исследуемом материале | Химическое или спектрофотометрическое измерение железа после разрушения гемсодержащих соединений | Косвенный и неточный способ оценки гемоглобина; зависит от внегемоглобинового железа и обменных процессов |
| Газометрическое исследование | Парциальное давление O2, CO2, насыщение и кислотно-основное состояние | Анализ растворенных газов и степени насыщения гемоглобина | Характеризует дыхательную функцию крови, но не устанавливает ее концентрацию гемоглобина |
Концентрация гемоглобина является основным лабораторным критерием анемии и эритроцитоза, но должна интерпретироваться вместе с гематокритом, количеством эритроцитов и эритроцитарными индексами. При подозрении на воздействие угарного газа дополнительно исследуют карбоксигемоглобин, не подменяя им общий показатель гемоглобина. Таким образом, среди перечисленных вариантов именно гемиглобинцианидный метод обеспечивает наиболее обоснованное сочетание аналитической точности и практической применимости.