2) концентрацией (+)
3) секрецией
4) фильтрацией
Калибровочная кривая в спектроскопическом анализе устанавливает количественную связь между измеряемой экстинкцией (оптической плотностью, или абсорбансом) и содержанием исследуемого вещества. Для построения кривой используют серию стандартных растворов с известной концентрацией, измеряют их оптическую плотность и наносят полученные значения на график. Поэтому по экстинкции неизвестной пробы можно определить её концентрацию методом интерполяции.
Основой взаимосвязи служит закон Бугера—Ламберта—Бера: A = ε·l·c, где A — экстинкция, ε — молярный коэффициент поглощения, l — длина оптического пути, c — концентрация вещества. При постоянных длине волны, толщине кюветы, составе растворителя и других условиях на рабочем диапазоне зависимость обычно линейна: увеличение концентрации вызывает пропорциональное повышение оптической плотности.
Экскреция, секреция и фильтрация характеризуют физиологические процессы образования, перемещения или выведения веществ в организме и не являются параметрами калибровки аналитического метода. Точность расчёта зависит от правильного холостого измерения, стабильности стандартов, соответствия матрицы образца и нахождения сигнала в пределах валидированного диапазона. При выходе за линейный участок применяют расширенный диапазон калибровки, разбавление образца или математическую нелинейную модель.
| Элемент калибровки | Содержание и диагностическое значение |
|---|---|
| Аналитический сигнал | Экстинкция, измеренная при заданной длине волны; отражает степень поглощения излучения исследуемым веществом. |
| Стандартный раствор | Раствор с известной концентрацией аналита, необходимый для формирования опорных точек калибровочной зависимости. |
| Рабочий диапазон | Интервал концентраций, в котором метод обеспечивает приемлемую линейность, точность и прецизионность результатов. |
| Наклон кривой | Чувствительность метода: чем больше изменение экстинкции при изменении концентрации, тем выше аналитическая чувствительность. |
| Точка пересечения с осью | Может отражать вклад холостого раствора, фонового поглощения или систематическое смещение измерительной системы. |
| Нелинейность | Возникает при чрезмерно высокой концентрации, рассеянии света, химических превращениях аналита или влиянии матрицы; требует проверки условий анализа. |
Калибровочная зависимость является основой количественной спектрофотометрии и используется для пересчёта инструментального сигнала в результат концентрации. При контроле качества оценивают коэффициент корреляции или коэффициент детерминации, остатки регрессии и воспроизводимость калибровочных точек. Результат образца должен рассчитываться только в пределах подтверждённого диапазона метода. Соблюдение этих требований обеспечивает метрологическую прослеживаемость и сопоставимость лабораторных результатов.