2) поглощенного
3) излученного
4) отраженного
Нефелометрия основана на регистрации интенсивности света, рассеянного частицами, находящимися в анализируемой пробе. В клинической лабораторной диагностике такими частицами часто являются иммунные комплексы, образующиеся при взаимодействии антигена с антителом; их количество связано с концентрацией определяемого вещества. Детектор располагают под углом к направлению падающего светового пучка, наиболее часто около 90°, поэтому он регистрирует именно боковое рассеяние, а не ослабление прошедшего или отражение света.
Интенсивность рассеянного излучения зависит от концентрации, размера, формы и оптических свойств частиц, а также от длины волны и состава среды. В пределах рабочего диапазона после калибровки полученный сигнал используют для количественного определения иммуноглобулинов, компонентов комплемента, С-реактивного белка и других белков. Нефелометрию следует отличать от турбидиметрии: при турбидиметрии оценивают снижение интенсивности света, прошедшего через образец, тогда как при нефелометрии измеряют свет, отклонённый частицами в сторону.
| Метод | Регистрируемый оптический сигнал | Особенности измерительной схемы | Типичные области применения |
|---|---|---|---|
| Нефелометрия | Интенсивность света, рассеянного частицами | Детектор расположен под углом к падающему пучку, часто около 90° | Определение иммуноглобулинов, компонентов комплемента, С-реактивного белка |
| Иммунонефелометрия | Рассеяние света иммунными комплексами | Антиген связывается со специфическим антителом с образованием измеряемых комплексов | Количественная оценка сывороточных белков и других антигенов |
| Турбидиметрия | Ослабление интенсивности света, прошедшего через пробу | Детектор находится на линии прохождения светового пучка | Исследование мутности, фотометрические реакции, иммунопреципитационные тесты |
| Спектрофотометрия | Поглощение света веществом на определённой длине волны | Измеряется разница между интенсивностью падающего и прошедшего излучения | Определение глюкозы, билирубина, активности ферментов и электролитов в фотометрических реакциях |
| Флуориметрия | Интенсивность вторичного флуоресцентного излучения | Регистрируется излучение, испускаемое флуорофором после возбуждения | Иммунофлуоресцентные и высокочувствительные молекулярные анализы |
| Рефлектометрия | Интенсивность света, отражённого от реакционной зоны | Оценивается отражение от сухого реагентного носителя или тест-полоски | Экспресс-определение глюкозы, гемоглобина и других показателей |
Нефелометрический сигнал особенно информативен при реакциях, в которых образуются дисперсные частицы или иммунные агрегаты. На результат могут влиять избыток антигена, неполное формирование комплексов, неспецифическая агрегация, мутность и гемолиз образца. Поэтому достоверность исследования обеспечивается использованием калибраторов, контрольных материалов и соблюдением линейного диапазона метода. Ключевой отличительный признак нефелометрии — регистрация рассеянного, а не поглощённого или прошедшего через образец света.