2) реакция преципитации
3) реакция лизиса
4) РИА (+)
Радиоиммуноанализ (РИА) относится к иммунологическим методам, основанным на использовании меченых реагентов. В качестве метки применяют радиоактивный изотоп, чаще 125I или 3H, которым маркируют антиген либо антитело. Радиоактивность измеряют специальным счетчиком, а концентрацию исследуемого вещества определяют по калибровочной кривой.
Классический РИА обычно основан на конкурентном взаимодействии: меченый и немеченый антиген конкурируют за ограниченное количество специфических антител. Чем выше содержание анализируемого антигена в пробе, тем меньше меченого антигена связывается с антителами и тем ниже регистрируемый радиоактивный сигнал. В иммунометрических вариантах используется избыток антител, одно из которых имеет радионуклидную метку; интенсивность сигнала в этом случае прямо связана с концентрацией определяемого вещества.
Агглютинация, преципитация и лизис являются иммунологическими реакциями, но в исходном варианте не требуют введения радиоактивной или иной метки: результат оценивают по склеиванию частиц, образованию осадка или разрушению клеток. Поэтому именно РИА соответствует критерию метода, основанного на применении меченых реагентов. Метод применялся для определения гормонов, лекарственных препаратов, опухолевых маркеров и антител, однако во многих лабораториях заменен более безопасными немечеными и ферментными иммунными методами.
| Метод | Меченый реагент | Основной принцип | Характер сигнала или результата |
|---|---|---|---|
| Радиоиммуноанализ | Антиген или антитело, меченные радионуклидом | Конкурентное либо иммунометрическое связывание | Радиоактивность измеряется счетчиком; сигнал может быть обратно или прямо пропорционален концентрации аналита |
| Иммуноферментный анализ | Антиген или антитело, конъюгированные с ферментом | Иммунное связывание с последующей ферментативной реакцией | Изменение оптической плотности раствора |
| Иммунофлуоресцентный анализ | Антитело или антиген, меченные флуорохромом | Специфическое связывание с визуализацией в люминесцентном микроскопе | Флуоресценция исследуемой структуры |
| Реакция агглютинации | Обычно немеченые антитела и корпускулярный антиген | Перекрестное связывание частиц с образованием агрегатов | Видимое склеивание частиц или выпадение хлопьев |
| Реакция преципитации | Растворимый антиген и специфическое антитело | Формирование нерастворимого иммунного комплекса | Появление осадка или линии преципитации |
| Реакция лизиса | Антитела и комплемент либо другие литические факторы | Повреждение мембраны клетки или микроорганизма иммунным механизмом | Разрушение клеток, гемолиз или утрата жизнеспособности микроорганизмов |
Ключевой диагностический признак РИА — инструментальная регистрация сигнала, связанного с радиоактивной меткой иммунного реагента. Интерпретация результата требует использования стандартов, калибровочной кривой и контроля качества. При работе с радионуклидами необходимы специализированное оборудование, радиационный контроль и соблюдение правил обращения с радиоактивными материалами.