2) бензидиновая (ортотолидиновая) проба
3) иммунохроматографический тест (+)
4) пирамидоновая проба
Правильный ответ — иммунохроматографический тест на гемоглобин человека, или иммунохимический тест кала (FIT). Метод основан на реакции антиген–антитело: гемоглобин в исследуемом образце связывается с мечеными моноклональными антителами, а образовавшийся комплекс мигрирует по тест-системе и фиксируется в диагностической зоне. Благодаря высокой аффинности антител метод выявляет небольшие количества человеческого гемоглобина и обладает большей аналитической специфичностью по сравнению с химическими пробами.
Важное преимущество FIT — отсутствие существенного влияния пищевых продуктов, растительных пероксидаз и большинства лекарственных веществ, которые могут изменять результат реакций, основанных на окислении хромогена. Глобин разрушается при прохождении крови через верхние отделы желудочно-кишечного тракта, поэтому тест преимущественно отражает кровотечение из толстой кишки и прямой кишки. Положительный результат свидетельствует о наличии крови в кале, но не устанавливает источник кровотечения и не является самостоятельным признаком колоректального рака.
Гваяковая, бензидиновая, ортолидиновая и пирамидоновая пробы основаны на псевдопероксидазной активности гемовой группы: в присутствии перекиси водорода гемоглобин вызывает окисление индикатора с появлением окраски. Эти реакции менее специфичны, поскольку могут давать ложноположительные результаты при употреблении мяса, некоторых овощей и при наличии других окислителей; часть из них также имеет ограниченную аналитическую чувствительность и в настоящее время применяется преимущественно как исторический или учебный метод.
| Критерий | Иммунохроматографический тест | Химические пробы на скрытую кровь |
|---|---|---|
| Определяемый компонент | Человеческий гемоглобин или его иммунологически распознаваемые фрагменты | Гемовая группа с пероксидазоподобной активностью |
| Принцип реакции | Специфическое связывание антигена с антителами и визуальная регистрация тестовой линии | Окисление хромогенного субстрата перекисью водорода |
| Аналитическая специфичность | Высокая: реакция ориентирована на человеческий гемоглобин | Низкая или умеренная: возможны реакции с животным гемоглобином и пищевыми пероксидазами |
| Чувствительность к кровотечению | Выявляет небольшие количества крови; порог зависит от конкретного набора | В большей степени зависит от концентрации гемоглобина и условий проведения реакции |
| Влияние питания | Обычно клинически значимого ограничения рациона не требуется | Возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты из-за продуктов и препаратов |
| Преимущественная диагностическая зона | Кровотечения нижних отделов желудочно-кишечного тракта, особенно толстой кишки | Кровь из различных отделов ЖКТ, но локализация по результату не определяется |
| Основное ограничение | Ложноотрицательный результат возможен при прерывистом кровотечении, неправильном взятии материала или деградации гемоглобина | Низкая специфичность и необходимость учитывать пищевые и лекарственные интерференции |
Интерпретация результата должна учитывать качество сбора образца и периодичность кровотечения. Положительный FIT требует дальнейшего обследования, обычно эндоскопической верификации источника кровопотери. Отрицательный результат снижает вероятность значимого кровотечения, но не исключает заболевание при сохраняющихся симптомах или высокой клинической настороженности. Поэтому иммунохимический тест является оптимальным скрининговым методом среди перечисленных, но не заменяет диагностическую колоноскопию.