2) высокой специфичностью (+)
3) отсутствием стадии пробоподготовки
4) теми же физико-химическими принципами, что и скрининговое исследование
Подтверждающее исследование при химико-токсикологическом анализе должно обладать высокой аналитической специфичностью, то есть достоверно отличать искомое вещество от его метаболитов, структурно сходных соединений, лекарственных препаратов и компонентов биологического материала. Именно специфичность позволяет установить идентичность токсиканта и обосновать заключение о его наличии, тогда как высокая чувствительность лишь обеспечивает обнаружение малых концентраций и сама по себе не исключает ложноположительных результатов.
Скрининговые методы ориентированы на быстрое обследование большого числа образцов и обычно имеют высокую чувствительность. К ним относятся иммунохимические реакции, тонкослойная хроматография и другие предварительные методики; их положительный результат рассматривается как предположительный и требует подтверждения. На подтверждающем этапе применяют методы с несколькими независимыми признаками идентификации: например, сочетание времени удерживания, характеристик масс-спектра и соотношения диагностических ионов при газовой или жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией.
Пробоподготовка при подтверждающем анализе обычно необходима: она может включать экстракцию, очистку, концентрирование, гидролиз или дериватизацию образца. Использование тех же физико-химических принципов, что и при скрининге, не является обязательным и не гарантирует устранения исходной аналитической ошибки; предпочтительны независимый или ортогональный подход и выполнение валидированных критериев приемлемости. Поэтому основным требованием к подтверждающему тесту является высокая специфичность, а чувствительность, точность, прецизионность и предел количественного определения оцениваются дополнительно.
| Этап или метод | Основная задача | Типичные признаки результата | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Скрининг | Быстрое выявление возможного присутствия группы веществ | Реакция антитела, ориентировочная миграция, общий сигнал | Предварительный результат, требующий подтверждения |
| Иммунохимический анализ | Обнаружение антигена или структурно близких соединений | Связывание с антителом, пороговая интенсивность сигнала | Высокая пропускная способность, но возможна перекрёстная реактивность |
| Газовая хроматография — масс-спектрометрия | Подтверждение летучих или дериватизированных соединений | Время удерживания и характерный масс-спектр | Высокая специфичность идентификации при совпадении с эталоном |
| Жидкостная хроматография — тандемная масс-спектрометрия | Подтверждение полярных, термолабильных веществ и метаболитов | Время удерживания, переходы родительский ион — дочерний ион , их соотношение | Надёжная идентификация и количественное определение в сложной матрице |
| Пробоподготовка | Удаление матричных примесей и повышение концентрации аналита | Экстракция, очистка, концентрирование, иногда гидролиз или дериватизация | Снижает матричный эффект и повышает достоверность измерения |
| Критерии подтверждения | Оценка аналитической достоверности положительного результата | Селективность, точность, прецизионность, воспроизводимость, соответствие эталонному стандарту | Позволяют отличить истинное обнаружение от интерференции и ложноположительного сигнала |
Подтверждающий результат интерпретируют с учётом вида биоматериала, стабильности вещества и возможного образования метаболитов. Количественная оценка должна выполняться по валидированной калибровочной модели с контролем качества и учётом матричных эффектов. Наличие вещества в образце не всегда доказывает интоксикацию: заключение сопоставляют с концентрацией, временем поступления, клиническими данными и фармакокинетикой соединения.