2) нейтрофилы
3) лимфоциты
4) эритроциты
В 3-DIFF-анализаторах лейкоциты подсчитываются преимущественно методом электрического импеданса: клетки проходят через апертуру в потоке электролита и вызывают кратковременное изменение электрического сопротивления. Амплитуда импульса соответствует объёму клетки, поэтому прибор распределяет лейкоциты на три размерные популяции: лимфоциты, клетки промежуточного размера (MID) и гранулоциты. Такой подход оценивает главным образом размер клеток, но не их морфологические и цитохимические признаки.
Моноциты и эозинофилы могут иметь перекрывающиеся объёмные характеристики и в стандартном 3-DIFF-анализаторе попадают в одну промежуточную фракцию MID; к ней также могут относиться базофилы и некоторые атипичные или незрелые клетки. Поэтому точное раздельное определение моноцитов и эозинофилов этим методом невозможно, а результат выдается как суммарная доля MID-клеток. Для получения полноценной пятичастной лейкоцитарной формулы необходим анализ по нескольким физико-химическим характеристикам, например с использованием лазерной проточной цитометрии, флуоресцентных красителей или цитохимических реакций.
| Популяция | Основной признак в 3-DIFF | Результат измерения | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Лимфоциты | Наименьший средний объём среди основных лейкоцитарных групп | Выделяются в отдельный кластер LYM | Атипичные лимфоциты и бластные клетки могут изменять распределение по объёму |
| Моноциты | Клетки промежуточного размера | Учитываются преимущественно в составе MID | Неотделимы от эозинофилов и части других клеток только по объёму |
| Эозинофилы | Размер может перекрываться с моноцитами и другими MID-клетками | Учитываются в суммарной MID-фракции | Точное процентное и абсолютное содержание отдельно не определяется |
| Базофилы | Редкая популяция с вариабельными размерными характеристиками | Обычно включаются в MID или иные промежуточные зоны | Отдельная оценка требует 5-DIFF-анализа |
| Нейтрофилы | Крупная гранулоцитарная популяция | Формируют кластер GRA вместе с другими гранулоцитами | Нейтрофилы не разделяются в 3-DIFF на отдельную полноценную субпопуляцию от других гранулоцитов |
| Эритроциты | Удаляются реагентом для лизиса при подготовке лейкоцитарного канала | Не входят в лейкоцитарную формулу | Их подсчёт выполняется в отдельном эритроцитарном канале |
Таким образом, ключевым ограничением 3-DIFF является классификация клеток по трём диапазонам объёма, а не их полноценная морфологическая идентификация. Повышение MID-фракции не позволяет само по себе установить, связано ли оно с моноцитозом, эозинофилией или присутствием других промежуточных клеток. При клинически значимых отклонениях необходимы 5-DIFF-исследование, микроскопия мазка периферической крови или дополнительные иммунологические методы. Лейкоцитарная формула, полученная на 3-DIFF-анализаторе, должна интерпретироваться с учётом этих аналитических ограничений.