2) две; одном помещении
3) две; отдельных помещениях (+)
4) три; двух помещениях
Третья рабочая зона ПЦР-лаборатории предназначена для амплификации нуклеиновых кислот и последующей детекции продуктов амплификации. При организации лаборатории она может быть разделена на две подзоны: зону проведения амплификации и зону выявления ампликонов. Эти подзоны размещают в отдельных помещениях, поскольку после завершения реакции образуется большое количество копий целевой нуклеотидной последовательности.
Ампликоны легко распространяются с аэрозолями, инструментами, перчатками и поверхностями. Их перенос в помещение, где готовят реакционные смеси или обрабатывают первичный материал, приводит к контаминации проб и ложноположительным результатам. Поэтому основой противоэпидемического и аналитического режима является однонаправленный поток материалов и персонала — от чистых этапов к грязным , без возврата использованных материалов в предыдущие зоны. Именно этот принцип определяет правильность разделения третьей зоны на две подзоны в отдельных помещениях.
| Участок ПЦР-лаборатории | Основные операции | Ключевой риск или организационный принцип |
|---|---|---|
| Первая рабочая зона | Приготовление реактивов, контроль их качества, подготовка расходных материалов | Максимальная защита от заноса нуклеиновых кислот и ампликонов |
| Вторая рабочая зона | Прием и подготовка клинического материала, выделение ДНК или РНК | Работа с потенциально инфекционными образцами; исключение контакта с продуктами амплификации |
| Подзона амплификации | Внесение подготовленных образцов в реакционную смесь и проведение ПЦР в амплификаторе | Пробирки после постановки реакции не должны возвращаться в чистые помещения |
| Подзона детекции | Регистрация сигнала в режиме реального времени либо анализ продуктов амплификации после реакции | Наиболее высокий риск образования и распространения ампликон-содержащего аэрозоля |
| Раздельное размещение подзон | Использование самостоятельных помещений, оборудования и расходных материалов | Снижение вероятности перекрестной контаминации и ложноположительных результатов |
| Маршрут движения | Перемещение персонала и материалов от первой зоны ко второй и далее к третьей | Обратное перемещение не допускается; применяются отдельные халаты, перчатки и инвентарь |
Таким образом, нормативно обоснованным является разделение третьей рабочей зоны на две подзоны, расположенные в отдельных помещениях. Деление на большее число подзон не соответствует базовой функциональной структуре этого этапа: амплификация и детекция являются двумя основными операционными блоками. При использовании закрытых систем детекции риск контаминации может быть ниже, однако требования к направленности рабочего потока и предотвращению переноса ампликонов сохраняют значение.