2) Драгендорфа
3) Ван-Урка (+)
4) Триндлера
Правильным является реактив Ван-Урка, поскольку он преимущественно выявляет соединения, содержащие индольное ядро. Псилоцибин представляет собой фосфорилированное производное триптамина и сохраняет электронно-богатую индольную структуру, которая вступает в характерную цветную реакцию. При обработке хроматографической зоны реактивом Ван-Урка псилоцибин дает серо-фиолетовое окрашивание, тогда как псилоцин обычно образует менее интенсивную синюю зону.
Основным хромогенным компонентом реактива служит пара-диметиламинобензальдегид. В сильнокислой среде его карбонильная группа активируется, после чего происходит электрофильное взаимодействие с наиболее реакционноспособным участком индольного кольца и образование протяженной сопряженной системы. Появление окраски связано с поглощением видимого света образовавшимся хромофором; оттенок и интенсивность зависят от строения индольного производного, состава реактива и условий проведения реакции.
Селективность этой пробы следует понимать как групповую, а не абсолютную: реактив Ван-Урка обнаруживает также другие индолы и триптамины. Поэтому цветная реакция применяется для предварительной идентификации, особенно как способ визуализации после тонкослойной хроматографии. Достоверное установление наличия псилоцибина требует подтверждения более специфичным методом, например высокоэффективной жидкостной хроматографией с масс-спектрометрическим детектированием.
| Реактив или метод | Аналитическая мишень | Принцип реакции | Значение для выявления псилоцибина |
|---|---|---|---|
| Ван-Урка | Индольное ядро | Кислотно-катализируемое образование окрашенного продукта с пара-диметиламинобензальдегидом | Наиболее селективная из перечисленных реакций; используется для предварительного обнаружения псилоцибина и псилоцина |
| Браттона–Маршала | Первичные ароматические аминогруппы | Диазотирование с последующим азосочетанием и образованием окрашенного азокрасителя | Не соответствует основной структурной особенности псилоцибина и не является его селективной пробой |
| Драгендорфа | Основные азотсодержащие соединения, преимущественно алкалоиды | Образование малорастворимых ионных комплексов с йодвисмутатом | Обладает широкой групповой чувствительностью, поэтому не позволяет отличить псилоцибин от многих других алкалоидов |
| Триндера | Салицилаты и некоторые фенольные соединения | Комплексообразование с ионами железа(III) с появлением фиолетовой окраски | Применяется главным образом для определения салицилатов и не является характерной реакцией на псилоцибин. |
| Тонкослойная хроматография с реактивом Ван-Урка | Разделенные индольные соединения | Сочетание различий в хроматографической подвижности и характерной окраски зон | Повышает диагностическую ценность реакции и позволяет дифференцировать псилоцибин и псилоцин |
| ВЭЖХ–МС/МС | Молекула псилоцибина и специфические ионы-продукты | Хроматографическое разделение с масс-спектрометрической идентификацией | Подтверждающий метод с существенно более высокой специфичностью и возможностью количественного определения |
Псилоцибин является относительно полярным фосфорилированным соединением и в организме быстро дефосфорилируется до фармакологически активного псилоцина. Это превращение, а также ограниченная стабильность аналитов необходимо учитывать при выборе биологического материала, пробоподготовке и интерпретации результатов. Цветные реакции удобны для скрининга, но не определяют концентрацию вещества и не исключают присутствия других индольных соединений. Окончательное лабораторное заключение должно основываться на хроматографическом разделении и подтверждении структуры аналита.