2) рецепторов
3) пор фосфолипидного бислоя
4) транспортных белков
В 5-Diff-гематологических анализаторах боковое светорассеяние (side scatter, SSC) регистрируется фотодетектором, расположенным примерно под углом 90° к направлению лазерного луча. Интенсивность этого сигнала определяется тем, насколько клетка и ее внутриклеточные структуры отклоняют свет: гранулы, органеллы, вакуоли и другие компоненты внутреннего содержимого. Поэтому SSC характеризует размер, количество и сложность внутриклеточных структур, то есть внутреннюю гранулярность клетки.
Наиболее выраженное боковое рассеяние обычно дают гранулоциты, особенно клетки с большим количеством специфических гранул; лимфоциты, имеющие относительно небольшое количество цитоплазматических органелл, формируют слабый SSC-сигнал. В отличие от него, прямое, или прямолинейное, светорассеяние (forward scatter, FSC) преимущественно коррелирует с общим размером клетки. Таким образом, отмеченный ответ отражает физический принцип дифференцировки лейкоцитов по степени внутриклеточной сложности.
В автоматическом 5-Diff-анализе сочетание параметров FSC и SSC позволяет разделять основные популяции лейкоцитов еще до применения дополнительных признаков, например флуоресценции нуклеиновых кислот. Однако SSC не является прямым морфометрическим измерением размера гранул и зависит также от оптических свойств клетки, ее формы, зрелости и условий окрашивания.
| Параметр или популяция | Физическая основа сигнала | Типичный уровень SSC | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Прямое светорассеяние (FSC) | Рассеяние света в направлении распространения лазерного луча | Связано преимущественно с размером клетки | Используется для оценки относительного клеточного объема и отделения мелких и крупных клеток |
| Боковое светорассеяние (SSC) | Рассеяние света под углом около 90° на внутриклеточных структурах | Зависит от гранулярности и внутренней сложности | Позволяет различать клетки с малым и большим количеством гранул и органелл |
| Лимфоциты | Небольшой объем цитоплазмы и относительно низкая органеллярная насыщенность | Обычно низкий | Формируют компактную область на цитограмме; выраженное увеличение SSC возможно при активации или атипии |
| Моноциты | Более развитая цитоплазма, наличие вакуолей и внутриклеточных структур | Средний | Отделяются от лимфоцитов по сочетанию большего FSC и более высокого SSC |
| Нейтрофилы | Большое количество цитоплазматических гранул и сложная внутренняя структура | Высокий | Обычно располагаются в зоне повышенного FSC/SSC и составляют основную гранулоцитарную популяцию |
| Эозинофилы и базофилы | Специфические гранулы с особыми оптическими свойствами | Высокий или атипичный, в зависимости от анализатора | Для их разделения применяются дополнительные каналы, лизис эритроцитов, окрашивание и алгоритмы анализа |
Изменение SSC может наблюдаться при созревании клеток, активации лейкоцитов, токсической зернистости и появлении патологических популяций. Интерпретация цитограмм должна проводиться совместно с абсолютными и относительными показателями лейкоцитарной формулы, флагами анализатора и результатами микроскопии мазка. При подозрении на бластные или атипичные клетки автоматическая классификация требует подтверждения морфологическим исследованием.