2) окрашиваются в красный цвет (+)
3) не окрашиваются
4) окрашиваются в черный цвет
При окраске эозином-нигрозином жизнеспособность сперматозоидов оценивают по целостности плазматической мембраны. У погибших клеток мембрана утрачивает избирательную проницаемость, поэтому эозин проникает внутрь клетки и окрашивает ее головку и другие клеточные структуры в розово-красный цвет. Таким образом, красное окрашивание является признаком нарушения мембранной целостности и соответствует нежизнеспособному сперматозоиду.
Нигрозин формирует контрастный темный фон, на котором хорошо различимы неокрашенные жизнеспособные сперматозоиды. Клетки с сохранной мембраной не пропускают эозин и остаются светлыми или практически бесцветными. Метод позволяет отличать неподвижные, но живые сперматозоиды от действительно погибших, поскольку отсутствие движения само по себе не доказывает утрату жизнеспособности.
| Исследуемый признак | Внешний вид в препарате | Диагностическая интерпретация |
|---|---|---|
| Сохранная плазматическая мембрана | Сперматозоид не окрашен эозином, хорошо виден на темном фоне | Клетка жизнеспособна, даже если ее движение отсутствует |
| Поврежденная плазматическая мембрана | Головка и клетка окрашены в розово-красный цвет | Сперматозоид погиб или необратимо утратил жизнеспособность |
| Эозин | Проникает в клетки с нарушенной мембранной проницаемостью | Основной индикаторный краситель жизнеспособности |
| Нигрозин | Окрашивает фон препарата в темный цвет | Повышает контраст и облегчает подсчет окрашенных и неокрашенных клеток |
| Неподвижный, но жизнеспособный сперматозоид | Остается неокрашенным | Не следует относить к погибшим только на основании отсутствия подвижности |
| Неподвижный и окрашенный сперматозоид | Имеет красную или розово-красную головку | Соответствует нежизнеспособной клетке |
| Оценка результата | Подсчитывают долю неокрашенных и окрашенных клеток | Определяют процент живых сперматозоидов и сопоставляют его с референсными значениями лаборатории |
Следовательно, красное окрашивание обусловлено проникновением эозина через поврежденную мембрану погибшего сперматозоида. Интенсивность окраски может варьировать от розовой до красной в зависимости от условий окрашивания, однако принцип интерпретации сохраняется. Для достоверности результата мазок оценивают своевременно, подсчитывая достаточное число клеток и соблюдая стандартизированные условия подготовки препарата. Показатель жизнеспособности следует интерпретировать совместно с концентрацией, подвижностью и морфологией сперматозоидов.