2) Папаниколау (+)
3) Граму
4) Лейшману
Влажная фиксация необходима при окрашивании по Папаниколау: мазок сразу после нанесения погружают в 95% этанол или другой спиртовой фиксатор, не допуская высыхания на воздухе. Спирт стабилизирует белковые структуры клеток и сохраняет четкость ядерного хроматина, контуры ядер, ядерно-цитоплазматическое соотношение и прозрачность цитоплазмы. Эти признаки имеют принципиальное значение при цитологической оценке воспалительных, предраковых и злокачественных изменений.
Высушивание мазка до фиксации вызывает артефакты: сморщивание клеток, неравномерное уплотнение хроматина, изменение окраски цитоплазмы и появление фоновых преципитатов. В результате могут быть искажены критерии клеточной атипии, включая гиперхромию, неправильность ядерных контуров и увеличение ядерно-цитоплазматического отношения. Поэтому для метода Папаниколау обязательна немедленная влажная фиксация, тогда как ряд гематологических и бактериологических методов предусматривает высушивание мазка.
| Метод окрашивания | Типичная фиксация | Основная диагностическая задача | Критически сохраняемые признаки |
|---|---|---|---|
| Папаниколау | Влажная фиксация в 95% этаноле или спиртовом фиксаторе | Цитологическое исследование эпителия, выявление предраковых и опухолевых изменений | Детали ядерного хроматина, ядерные контуры, прозрачность и полихромность цитоплазмы |
| Паппенгейм | Обычно высушивание на воздухе с последующей фиксацией метанолом в составе красителя | Исследование клеток крови и костного мозга | Размер, форма и гранулярность клеток крови, особенности лейкоцитарной дифференцировки |
| Лейшман | Воздушная сушка; метанол одновременно фиксирует мазок | Морфология форменных элементов крови и паразитов | Ядерные и цитоплазматические структуры клеток крови, специфическая зернистость |
| Грам | После высушивания обычно применяют термическую или метанольную фиксацию | Дифференциация бактерий по строению клеточной стенки | Удержание кристаллического фиолетового грамположительными бактериями и контрастное окрашивание грамотрицательных |
| Окрашивание по Романовскому—Гимзе | Воздушная сушка и фиксация метанолом | Гематологическая и паразитологическая диагностика | Хроматин, цитоплазматическая зернистость, внутриклеточные микроорганизмы |
| Высушивание до фиксации при цитологическом мазке | Нежелательно для метода Папаниколау | Может использоваться в отдельных методиках, но не является стандартом для Папаниколау | Возникают артефакты воздушной сушки, затрудняющие оценку ядерной атипии |
Таким образом, правильный выбор обусловлен особенностями цитологической методики, ориентированной на максимально точную оценку ядер и цитоплазмы. Влажная фиксация должна выполняться непосредственно после приготовления мазка, поскольку даже кратковременное высыхание ухудшает качество препарата. Метанольная фиксация в методах Паппенгейма и Лейшмана не означает необходимости влажной фиксации в смысле метода Папаниколау. Для окраски по Граму ключевым является сохранение различий клеточной стенки бактерий, а не предупреждение воздушной сушки клеток эпителия.