2) всех хромосом набора
3) природы маркерных хромосом (+)
4) бэндов на аутосомах
Ag-NOR-бэндинг — это серебряная окраска ядрышковых организаторов (NOR, nucleolar organizer regions), содержащих кластеры генов рибосомной РНК. Серебро связывается с аргирофильными белками, ассоциированными с активными участками NOR, поэтому они выявляются в виде интенсивно окрашенных участков, обычно расположенных в области вторичных перетяжек коротких плеч акроцентрических хромосом 13, 14, 15, 21 и 22.
Метод используют для уточнения природы маркерных хромосом, если дополнительная хромосомная структура содержит сохранившийся и функционально активный NOR. Наличие Ag-NOR-позитивного участка позволяет предположить происхождение маркера от акроцентрической хромосомы и отличить его от маркеров, не содержащих ядрышкового организатора. Отрицательный результат не исключает такого происхождения полностью, поскольку NOR может быть инактивирован или утрачен; окончательная идентификация при необходимости проводится с применением FISH, хромосомного микроматричного анализа или секвенирования.
Выявление конститутивного гетерохроматина на хромосомах 1, 9 и 16 относится преимущественно к C-бэндингу, а получение индивидуального рисунка большинства хромосом — к G-бэндингу. Поэтому Ag-NOR-бэндинг не предназначен для сплошной идентификации всех хромосом набора или стандартных полос на аутосомах.
| Метод | Основная мишень | Типичный диагностический результат | Применение при анализе маркерной хромосомы |
|---|---|---|---|
| Ag-NOR-бэндинг | Активные ядрышковые организаторы и связанные с ними белки | Сереброположительные участки в области вторичных перетяжек акроцентрических хромосом | Подтверждение наличия у маркера NOR и вероятного происхождения от хромосомы 13, 14, 15, 21 или 22 |
| C-бэндинг | Конститутивный гетерохроматин | Интенсивное окрашивание центромерных и отдельных интеркалярных гетерохроматиновых районов | Оценка гетерохроматиновых блоков, в том числе на хромосомах 1, 9 и 16 |
| G-бэндинг | Дифференциально окрашиваемые эухроматиновые и гетерохроматиновые сегменты | Воспроизводимый полосатый рисунок всех хромосом | Стандартное кариотипирование и поиск структурных перестроек |
| Q-бэндинг | Участки, связывающие флуорохромы, прежде всего AT-богатые последовательности | Флуоресцентный рисунок хромосом при микроскопии в ультрафиолетовом свете | Дополнительная идентификация отдельных хромосом и Y-хромосомы |
| FISH | Специфические ДНК-последовательности, выбранные в качестве зондов | Флуоресцентный сигнал в определённой хромосомной области | Установление хромосомного происхождения маркера и наличия конкретных генов или центромерных последовательностей |
| Хромосомный микроматричный анализ | Изменения числа копий ДНК по всему геному | Делеции, дупликации и амплификации с определением их геномных координат | Оценка геномного дисбаланса, но не всегда определение структуры и расположения маркерной хромосомы |
Диагностическое значение Ag-NOR определяется именно сохранностью и активностью ядрышкового организатора, а не общим фактом наличия дополнительного хромосомного материала. Метод особенно полезен как цитогенетический ориентир при исследовании малых сверхкомплектных маркерных хромосом. Интерпретация результата должна учитывать мозаицизм, вариабельность активности NOR и возможность структурной перестройки маркера. Для окончательного определения его происхождения наиболее информативно сочетание Ag-NOR с молекулярно-цитогенетическими методами.