2) уровня продуктов окисления холестерина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрии (+)
3) активности лизосомных ферментов биохимическим методом
4) уровня мочевой кислоты в крови энзиматическим методом
Болезнь Ниманна–Пика типа C — аутосомно-рецессивное лизосомное заболевание, обусловленное патогенными вариантами генов NPC1 или NPC2. Дефект внутриклеточного транспорта неэтерифицированного холестерина и сфинголипидов приводит к их накоплению в поздних эндосомах и лизосомах. В результате усиливается образование оксистеролов — стабильных продуктов окисления холестерина, концентрацию которых определяют высокоэффективной жидкостной хроматографией с тандемной масс-спектрометрией (HPLC-MS/MS).
Повышение холестан-3β,5α,6β-триола, 7-кетохолестерина и других оксистеролов используется как чувствительный биохимический маркер для скрининга пациентов с подозрением на болезнь Ниманна–Пика типа C. Исследование особенно важно при сочетании прогрессирующей гепатоспленомегалии или неонатального холестаза с неврологическими проявлениями: вертикальным параличом взора, атаксией, дизартрией, катаплексией, когнитивным снижением. Повышение оксистеролов не является абсолютно специфичным, поэтому положительный результат требует подтверждения молекулярно-генетическим исследованием NPC1 и NPC2.
Определение активности лизосомных ферментов не является основным способом диагностики типа C, поскольку заболевание связано преимущественно с нарушением транспорта холестерина, а не с изолированным дефицитом фермента. Ферментные исследования применяют главным образом для дифференциальной диагностики, например для исключения дефицита кислой сфингомиелиназы при типах A и B. Экскреция мукополисахаридов и концентрация мочевой кислоты не отражают патогенез болезни Ниманна–Пика типа C.
| Исследование или признак | Что отражает | Диагностическая роль | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Оксистеролы: холестан-3β,5α,6β-триол, 7-кетохолестерин | Нарушение внутриклеточного метаболизма и транспорта холестерина | Основной биохимический скрининговый маркер; оптимально определять методом HPLC-MS/MS | Возможны повышения при холестатических заболеваниях печени и некоторых других состояниях |
| Лизосфингомиелин-509 | Накопление сфинголипидов при нарушении лизосомного транспорта | Высокоинформативный дополнительный маркер болезни Ниманна–Пика типа C | Не обладает абсолютной специфичностью и требует интерпретации вместе с клиническими данными |
| Метаболиты желчных кислот, производные оксистеролов | Альтернативный путь выведения патологически накапливающегося холестерина | Особенно полезны при раннем возрасте и неонатальном холестазе; исследуются масс-спектрометрическими методами | Доступность метода ограничена, результаты требуют лабораторной валидации |
| Окрашивание филипином в культуре фибробластов | Накопление неэтерифицированного холестерина в лизосомах | Функциональное подтверждение дефекта транспорта холестерина | Трудоёмко, зависит от качества культуры клеток, возможны ложноотрицательные результаты |
| Молекулярно-генетическое исследование NPC1/NPC2 | Наличие биаллельных патогенных вариантов | Подтверждает этиологический диагноз и позволяет проводить семейное консультирование | Не всегда выявляет глубокие интронные, регуляторные или структурные варианты стандартной панелью |
| Активность кислой сфингомиелиназы и других лизосомных ферментов | Ферментные дефекты, характерные для других лизосомных болезней накопления | Используется для дифференциальной диагностики типов A/B и других заболеваний | Не является специфическим диагностическим тестом для типа C |
Таким образом, HPLC-MS/MS-определение оксистеролов выявляет метаболическое следствие нарушения лизосомного транспорта холестерина. Наиболее убедительным считается сочетание характерного клинического фенотипа, повышения биомаркеров и обнаружения патогенных вариантов в NPC1 или NPC2. Ранняя диагностика имеет значение для назначения специфической терапии, включая субстрат-редуцирующее лечение миглустатом и симптоматическую неврологическую поддержку.