2) Hoechst 33258
3) Серебро
4) Акридиновый оранжевый
Краситель Гимза является стандартом рутинного цитогенетического исследования метафазных хромосом. Это смесь производных азура, метиленового синего и эозина, которая окрашивает ДНК и связанные с ней белковые структуры в сине-фиолетовые оттенки, обеспечивая визуальную оценку числа, размера и морфологии хромосом при световой микроскопии. Наиболее информативный вариант методики — GTG-окрашивание: после кратковременной обработки трипсином белки хромосом частично удаляются, и формируется воспроизводимый рисунок чередующихся светлых и тёмных G-полос.
Полосатый рисунок позволяет идентифицировать отдельные хромосомы и выявлять числовые и структурные аберрации: анеуплоидии, делеции, дупликации, инверсии, транслокации и крупные маркерные хромосомы. Другие перечисленные вещества применяются преимущественно для специальных задач: Hoechst 33258 и акридиновый оранжевый являются флуорохромами, а серебрение избирательно выявляет активные участки организаторов ядрышка. Поэтому они не заменяют Гимзу как универсальный метод рутинного анализа кариотипа.
| Метод или краситель | Принцип окрашивания | Основное диагностическое применение | Ограничение |
|---|---|---|---|
| Гимза | Связывание компонентов красителя с ДНК и хромосомными белками с образованием сине-фиолетовой окраски | Рутинная оценка кариотипа, подсчёт хромосом, анализ их формы и размеров | Разрешение ограничено для субмикроскопических перестроек |
| GTG-окрашивание | Предварительная трипсинизация с последующим окрашиванием Гимзой; формирование специфических G-полос | Идентификация хромосом и выявление крупных структурных перестроек | Результат зависит от времени протеолиза и качества подготовки препарата |
| Hoechst 33258 | Флуоресцентное связывание преимущественно с AT-богатыми участками малой бороздки ДНК | Флуоресцентная дифференциация ДНК, исследование гетерохроматина и отдельных участков генома | Требует флуоресцентной микроскопии и не является универсальной рутинной окраской кариотипа |
| Серебрение | Осаждение металлического серебра в участках, содержащих белки активных организаторов ядрышка | Ag-NOR-окрашивание для оценки активных районов коротких плеч акроцентрических хромосом | Окрашивает не все структурные элементы хромосом и отражает функциональную активность NOR |
| Акридиновый оранжевый | Интеркалирует в нуклеиновые кислоты и изменяет спектр флуоресценции в зависимости от типа и конформации субстрата | Цитофлуориметрия, оценка ДНК и РНК, исследование клеточного цикла и апоптоза | Не предназначен для стандартной идентификации всех хромосом в кариотипе |
Результаты окраски Гимзой оценивают с учётом Международной системы цитогеномной номенклатуры (ISCN). Кариотипирование особенно важно при подозрении на анеуплоидии, множественные врождённые пороки, задержку полового развития и нарушениях репродукции. При необходимости обнаружения малых копийных вариантов или криптических перестроек к стандартному исследованию добавляют FISH, хромосомный микроматричный анализ или секвенирование. Таким образом, Гимза сохраняет значение базового метода, с которого начинается морфологическая оценка хромосомного набора.