2) кровяной агар (+)
3) Эндо
4) щелочной дрожжевой агар
Streptococcus pneumoniae относится к требовательным к условиям культивирования грамположительным бактериям. Для его первичного выделения используют обогащённые питательные среды, прежде всего кровяной агар с добавлением обычно 5% дефибринированной крови. Инкубацию проводят при 35–37 °C, предпочтительно в атмосфере с повышенным содержанием углекислого газа. Кровь обеспечивает необходимые факторы роста и позволяет выявить характерный гемолиз.
На кровяном агаре пневмококк образует мелкие сероватые колонии, нередко с мукоидным видом за счёт полисахаридной капсулы, и вызывает α-гемолиз — неполное разрушение эритроцитов с появлением зеленоватого обесцвечивания среды. Для подтверждения идентификации используют чувствительность к оптохину и растворимость в желчи: в отличие от большинства зеленящих стрептококков, S. pneumoniae обычно чувствителен к оптохину и лизируется желчными солями. Капсульные антигены также могут выявляться латекс-агглютинацией, MALDI-TOF-масс-спектрометрией или молекулярными методами.
Мясопептонный агар не обеспечивает оптимального выделения пневмококка из клинического материала и может приводить к слабому росту. Среда Эндо подавляет большинство грамположительных микроорганизмов и предназначена преимущественно для энтеробактерий, а щелочной дрожжевой агар применяется для иных групп бактерий и не является стандартной средой для первичного посева S. pneumoniae. Поэтому диагностически обоснованным выбором является кровяной агар.
| Признак или метод | Характеристика для S. pneumoniae | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Питательная среда | Обогащённый кровяной агар | Обеспечивает факторы роста требовательного микроорганизма и визуализацию гемолиза |
| Атмосфера и температура | 35–37 °C, повышенное содержание CO2 | Создаёт условия, благоприятные для роста капнофильного пневмококка |
| Морфология колоний | Мелкие сероватые колонии; у капсульных штаммов возможен мукоидный вид | Помогает заподозрить возбудителя при первичном посеве |
| Тип гемолиза | α-гемолиз, зеленоватое окрашивание вокруг колоний | Характерен для пневмококка, но не является достаточным для окончательной идентификации |
| Окраска по Граму | Ланцетовидные грамположительные диплококки, часто в капсуле | Подтверждает принадлежность к пневмококкам в сочетании с культуральными признаками |
| Проба с оптохином | Зона задержки роста вокруг диска | Позволяет отличить пневмококк от большинства α-гемолитических зеленящих стрептококков |
| Растворимость в желчи | Лизис бактериальной суспензии при добавлении желчных солей | Дополнительный подтверждающий тест для идентификации вида |
Выбор кровяного агара основан на сочетании его обогащающих свойств и возможности оценить гемолитическую активность возбудителя. Отрицательный результат посева не исключает пневмококковую инфекцию после антибиотикотерапии или при низкой концентрации бактерий в материале. Для клинически значимых изолятов необходимо также определить серотип и чувствительность к антимикробным препаратам. Особое значение имеет оценка устойчивости к β-лактамам, макролидам и другим препаратам с учётом локальных данных антибиотикорезистентности.