2) производить взятие крови в контейнер без антикоагулянта
3) избегать гемолиза (+)
4) заморозить сыворотку до анализа
Избегание гемолиза является ключевым условием достоверного определения активности внутриклеточных ферментов в сыворотке. При разрушении эритроцитов их содержимое поступает в исследуемый образец, поэтому концентрация и активность ряда ферментов становятся искусственно повышенными. Наиболее выраженное влияние гемолиз оказывает на лактатдегидрогеназу и аспартатаминотрансферазу; одновременно высвобождаются калий, фосфаты и другие внутриклеточные компоненты.
Гемолиз может быть in vitro — связанным с травматичным взятием крови, использованием слишком тонкой иглы, интенсивным встряхиванием пробирки, несвоевременным отделением сыворотки или нарушением температурного режима. Такой результат не отражает истинное состояние пациента и способен привести к ложной гиперферментемии, ошибочной диагностике цитолиза, поражения печени, миокарда или мышечной ткани. Кроме того, гемоглобин как окрашенный компонент может непосредственно искажать спектрофотометрическое измерение активности ферментов.
Для профилактики гемолиза необходимы щадящая венепункция, правильное заполнение и перемешивание пробирки, соблюдение времени свертывания и быстрое отделение сыворотки от форменных элементов. Пробирка без антикоагулянта действительно используется для получения сыворотки, однако сама по себе не гарантирует качества образца. Положение тела и замораживание могут влиять на отдельные лабораторные показатели, но не являются основным источником систематической ошибки при оценке активности внутриклеточных ферментов.
| Фактор или показатель | Механизм влияния | Лабораторное значение | Практическая тактика |
|---|---|---|---|
| Гемолиз in vitro | Выход ферментов и электролитов из эритроцитов в сыворотку | Ложное повышение активности ЛДГ, АСТ и ряда других показателей | Оценить степень гемолиза; при выраженном влиянии отклонить образец и выполнить повторный забор |
| Лактатдегидрогеназа | Высокое содержание фермента внутри эритроцитов | Один из наиболее чувствительных маркеров гемолиза образца | Не интерпретировать значительное повышение без учета индекса гемолиза |
| Аспартатаминотрансфераза | Высвобождение фермента из эритроцитов и других поврежденных клеток | Возможна псевдогиперферментемия, имитирующая цитолиз | Сопоставлять результат с гемолизом, АЛТ, клиникой и другими показателями |
| Задержка отделения сыворотки | Продолжительный контакт с клетками крови и диффузия внутриклеточных компонентов | Постепенное изменение активности ферментов и концентраций метаболитов | Своевременно центрифугировать и отделять сыворотку |
| Пробирка без антикоагулянта | Позволяет получить сыворотку после естественного свертывания крови | Не устраняет риск механического гемолиза при взятии или транспортировке | Использовать тип пробирки, предусмотренный валидированной методикой |
| Замораживание образца | При нарушении условий хранения возможна нестабильность отдельных ферментов и повторное повреждение клеточных остатков | Результат зависит от конкретного фермента и числа циклов замораживания–размораживания | Соблюдать установленные сроки и температуру хранения; избегать повторного замораживания |
Индекс гемолиза следует учитывать вместе с клиническими данными и референсными интервалами лаборатории. Если степень гемолиза способна повлиять на результат, предпочтительно получить новый образец, а не корректировать показатель расчетным путем. Правильная преаналитическая подготовка является обязательной частью контроля качества биохимического исследования.