2) липополисахарид бактериальной стенки (+)
3) альбумин
4) нитросиний тетразолий
Липополисахарид (ЛПС, эндотоксин) является классическим поликлональным активатором В-лимфоцитов и вызывает их бласттрансформацию — переход из состояния покоя в метаболически активные клетки с увеличением размеров, синтезом ДНК и последующей пролиферацией. Основной механизм связан с распознаванием ЛПС комплексом TLR4–MD-2–CD14 на В-лимфоцитах и активацией внутриклеточных сигнальных путей NF-κB и MAPK. В результате усиливается экспрессия генов, регулирующих выживание, деление и функциональную активацию клеток.
ЛПС относится к Т-независимым митогенам: он способен активировать значительную часть В-клеточной популяции без специфического распознавания антигена Т-клетками и без обязательного участия Т-хелперов. Поэтому стимуляция ЛПС используется для оценки общей пролиферативной способности В-лимфоцитов. Фитогемагглютинин преимущественно активирует Т-лимфоциты, альбумин не обладает митогенными свойствами, а нитросиний тетразолий применяют для оценки окислительного метаболизма фагоцитов, а не для индукции бласттрансформации.
Реакция бласттрансформации с митогенами отражает функциональный резерв клеточного иммунитета и может применяться при обследовании пациентов с подозрением на иммунодефицит. В отличие от антиген-специфической пролиферации, митогенная стимуляция характеризует неспецифическую способность лимфоцитов отвечать делением на мощный активирующий сигнал.
| Стимулятор или метод | Основная клеточная мишень | Механизм или принцип | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Липополисахарид | В-лимфоциты | Активация TLR4-зависимого сигнального каскада, поликлональная стимуляция и индукция пролиферации | Оценка митогенного ответа и функциональной способности В-клеток |
| Фитогемагглютинин | Преимущественно Т-лимфоциты | Перекрёстное связывание мембранных гликопротеинов и запуск клеточной активации | Исследование пролиферативного ответа Т-клеточного звена |
| Конканавалин А | Т-лимфоциты | Лектин-индуцированная активация рецепторных комплексов лимфоцита | Дополнительный митоген для оценки клеточного иммунитета |
| Анти-CD3/анти-CD28 | Т-лимфоциты | Имитация сигнала через Т-клеточный рецептор и костимулирующий рецептор CD28 | Оценка максимально индуцируемой Т-клеточной пролиферации и функции |
| Альбумин | Не является специфической мишенью для активации лимфоцитов | Белок-носитель без типичного митогенного действия | Не используется как стандартный стимулятор бласттрансформации |
| Нитросиний тетразолий | Нейтрофилы и другие фагоциты | Восстановление красителя при образовании активных форм кислорода с формированием окрашенного формазана | Оценка оксидативного взрыва, в частности при подозрении на хроническую гранулематозную болезнь |
Таким образом, ЛПС соответствует функциональной направленности теста на митогенную активацию В-лимфоцитов. Результат реакции оценивают по увеличению включения меченых предшественников ДНК, экспрессии маркеров активации или числу образовавшихся бластных клеток. Снижение ответа может указывать на нарушение количества или функциональной полноценности В-клеток, однако интерпретируется с учётом возраста, лекарственной терапии и общего состояния иммунной системы.