2) прямая проба Кумбса
3) непрямая проба Кумбса (+)
4) проба с коллагеном
Непрямая проба Кумбса предназначена для выявления антител, циркулирующих в сыворотке. Исследуемую сыворотку инкубируют с тестовыми эритроцитами, содержащими соответствующий антиген, после чего клетки отмывают и добавляют антиглобулиновый реагент — антитела против иммуноглобулинов человека и/или компонентов комплемента. Если в сыворотке присутствуют антитела, они фиксируются на тестовых эритроцитах, а антиглобулиновый реагент вызывает их видимую агглютинацию.
Наиболее важными мишенями непрямого антиглобулинового теста являются неполные антитела класса IgG, которые в физиологическом растворе обычно не вызывают непосредственного склеивания эритроцитов. Такие аллоантитела могут появляться после переливаний крови или беременности у человека, не имеющего соответствующего эритроцитарного антигена. Поэтому метод применяют для скрининга антител, подбора совместимой донорской крови и проведения непрямой перекрёстной пробы.
Прямая проба Кумбса имеет иное назначение: она выявляет иммуноглобулины или комплемент, уже фиксированные на эритроцитах пациента in vivo, например при аутоиммунном гемолизе или гемолитической болезни новорождённых. Полиглюцин может усиливать агглютинацию в некоторых серологических реакциях, но не заменяет антиглобулиновую фазу и не является специфическим методом выявления сенсибилизирующих антител в сыворотке. Реакции с коллагеном относятся преимущественно к оценке агрегации тромбоцитов и не используются как основной тест для данной задачи.
| Метод или этап | Что выявляет | Исследуемый материал | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Непрямая проба Кумбса | Свободные антитела, способные связаться с антигенами эритроцитов | Сыворотка пациента и стандартные тест-эритроциты | Скрининг аллоантител, определение их специфичности и оценка совместимости крови |
| Прямая проба Кумбса | IgG и/или комплемент, фиксированные на эритроцитах | Эритроциты пациента | Диагностика иммунного гемолиза, гемолитической болезни новорождённых, посттрансфузионных реакций |
| Антиглобулиновая фаза | Связанные с эритроцитами иммуноглобулины после отмывания несвязанных белков | Сенсибилизированные тест-эритроциты | Агглютинация свидетельствует о наличии антител или комплемента, выявляемых реагентом Кумбса |
| Проба с полиглюкином | Агглютинацию, усиленную макромолекулярным реагентом | Эритроциты и исследуемая сыворотка | Может использоваться в отдельных серологических реакциях, но менее специфична для неполных IgG-антител |
| Проба с коллагеном | Активацию и агрегацию тромбоцитов | Тромбоцитарная суспензия или цельная кровь | Применяется для оценки функции тромбоцитов, а не для выявления эритроцитарных аллоантител |
| Отсутствие антигена у реципиента | Иммунологическую несовместимость при наличии соответствующего антитела | Эритроциты реципиента и его сыворотка | Требует подбора донорских эритроцитов, не несущих антиген-мишень |
Положительный результат непрямой пробы Кумбса не всегда означает клинически значимый гемолиз, поэтому выявленное антитело дополнительно идентифицируют на панели эритроцитов. Учитывают его титр или силу реакции, температурный оптимум и способность активировать комплемент. При подготовке к трансфузии подбирают эритроцитарный компонент, совместимый по системе ABO и отрицательный по соответствующему антигену. Это снижает риск гемолитической трансфузионной реакции и вторичного иммунного ответа.