2) эозин
3) метиленовый синий
4) бриллиант-крезиловый синий (+)
Бриллиант-крезиловый синий применяется для суправитальной окраски ретикулоцитов — окрашивания клеток до их фиксации. Ретикулоциты представляют собой молодые безъядерные эритроциты, в цитоплазме которых сохраняются остатки рибосомальной РНК и рибосом. Основной краситель связывается с этим кислым внутриклеточным материалом и вызывает его агрегацию, вследствие чего выявляется характерная сине-фиолетовая зернисто-сетчатая структура.
После инкубации крови с красителем в ретикулоцитах становятся видимыми гранулы и нити остаточной РНК; зрелые эритроциты такой структуры не имеют. Метод позволяет подсчитать относительное и абсолютное содержание ретикулоцитов и оценить регенераторную активность костного мозга. Азур I и эозин относятся преимущественно к компонентам окраски по Романовскому и не являются стандартными реагентами для выявления ретикулоцитарной субстанции, а обычный метиленовый синий уступает специализированному суправитальному красителю.
По степени выраженности сетчатой субстанции ретикулоциты разделяют на более молодые и более зрелые формы: чем плотнее и разветвлённее сеть, тем меньше времени прошло с момента выхода клетки из костного мозга. В норме в периферической крови преобладают зрелые ретикулоциты с небольшим количеством гранул; появление большого числа молодых форм указывает на усиленный выброс клеток при активной регенерации эритропоэза.
| Критерий | Характеристика | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Тип окраски | Суправитальная, выполняемая на нефиксированной крови | Сохраняет и выявляет внутриклеточную РНК ретикулоцита |
| Специализированный реагент | Бриллиант-крезиловый синий; также может использоваться новый метиленовый синий | Обеспечивает визуализацию ретикулоцитарной зернисто-сетчатой субстанции |
| Окрашиваемая структура | Остатки рибосомальной РНК и рибосом в цитоплазме | Подтверждает незрелость эритроцита и позволяет отличить ретикулоцит от зрелой клетки |
| Ретикулоцит | Сине-фиолетовые гранулы, нити или сетчатая структура на фоне слабее окрашенной цитоплазмы | Используется для подсчёта ретикулоцитов в периферической крови |
| Зрелый эритроцит | Однородная цитоплазма без сетчатого скопления РНК | Не учитывается как ретикулоцит при микроскопическом подсчёте |
| Молодые формы ретикулоцитов | Плотная, разветвлённая сетка; по мере созревания она распадается на отдельные гранулы | Соотношение молодых и зрелых ретикулоцитов отражает интенсивность регенерации эритропоэза |
Количество ретикулоцитов повышается при эффективном ответе костного мозга на гемолиз или острую кровопотерю, а также в период восстановления после лечения дефицитных анемий. Низкое или неадекватно нормальное содержание ретикулоцитов при анемии свидетельствует о недостаточной продукции эритроцитов. Для правильной оценки тяжёлой анемии дополнительно используют абсолютное число ретикулоцитов и скорректированный ретикулоцитарный индекс.