2) спорообразующих (+)
3) осмофильных
4) галофильных
Физические методы выделения чистой культуры основаны на различиях микроорганизмов в устойчивости к воздействию физических факторов. Для спорообразующих бактерий наиболее значим метод прогревания исследуемого материала: вегетативные клетки погибают при нагревании, тогда как эндоспоры сохраняются благодаря многослойной оболочке, низкому содержанию воды и наличию стабилизирующих компонентов, включая дипиколиновую кислоту. После термической обработки материал засевают на питательную среду; выжившие споры прорастают, а затем изолированная колония пересевается для получения чистой культуры.
Такой подход применяют прежде всего при выделении представителей родов Bacillus и Clostridium, поскольку их споры существенно устойчивее к нагреванию, высушиванию и другим физическим воздействиям, чем вегетативные формы сопутствующей микрофлоры. Режим обработки подбирают с учетом вида микроорганизма и состава материала: чрезмерное нагревание может снизить жизнеспособность и самих спор. При выделении анаэробных спорообразующих бактерий последующее культивирование проводят в условиях удаления кислорода.
Подвижность выявляют микроскопически или посевом в полужидкую среду, а галофильность и осмофильность используют преимущественно как признаки для подбора селективных питательных сред с повышенной концентрацией соли или сахаров. Поэтому эти свойства не создают такого выраженного преимущества при физическом воздействии, как устойчивость эндоспор к нагреванию. Чистоту выделенной культуры подтверждают однородностью колоний, одинаковой морфологией клеток, результатами окраски и отсутствием признаков смешанного роста.
| Признак или группа микроорганизмов | Основной принцип выделения | Физический фактор | Практический результат |
|---|---|---|---|
| Спорообразующие бактерии | Селективное уничтожение вегетативных клеток | Прогревание материала | Сохраняются эндоспоры, которые затем прорастают на питательной среде |
| Вегетативные неспорообразующие бактерии | Отсутствие устойчивой покоящейся формы | Нагревание обычно приводит к их гибели | Не могут быть избирательно сохранены таким методом |
| Подвижные бактерии | Выявление способности к активному движению | Микроскопия, посев в полужидкую среду | Используется для идентификации, а не для классического физического выделения |
| Галофильные бактерии | Рост при высокой концентрации хлорида натрия | Селективная солевая питательная среда | Преимущественно химико-питательная селекция |
| Осмофильные микроорганизмы | Рост при высокой осмолярности среды | Среды с повышенным содержанием сахаров или других осмотически активных веществ | Отбор по физиологической устойчивости, а не по спорообразованию |
| Полученная изолированная колония | Проверка однородности культуры | Макроскопия, микроскопия, окраска, пересев | Подтверждается чистота культуры и исключается смешанный рост |
Таким образом, правильный ответ связан с термоустойчивостью эндоспор. Физическая обработка выполняет этап предварительного обогащения, после которого необходимы посев на подходящую среду и контроль чистоты культуры. Видовую принадлежность подтверждают совокупностью культуральных, микроскопических, биохимических и, при необходимости, молекулярно-генетических признаков. Само наличие спор выявляют специальными методами окраски или по характерной морфологии клеток и колоний.