2) полимеразная цепная реакция
3) иммуноферментный анализ (+)
4) масс-спектрометрия
Иммунохимические методы основаны на специфическом взаимодействии антигена с антителом или других иммунореакциях. Иммуноферментный анализ (ИФА) является классическим представителем этой группы: в реакции участвуют исследуемый антиген или антитело, специфический иммунный реагент и ферментная метка. После образования иммунного комплекса фермент катализирует превращение субстрата в окрашенный продукт, интенсивность которого регистрируется фотометрически и связана с концентрацией определяемого компонента.
ИФА применяется для выявления антител, антигенов, гормонов, опухолевых маркеров, цитокинов, инфекционных агентов и других биомолекул. В сэндвич -формате концентрацию антигена определяют по интенсивности окраски, а в конкурентном варианте сигнал обычно обратно пропорционален содержанию аналита в образце. Высокая специфичность метода обеспечивается выбором антитела, а количественная оценка проводится по калибровочной зависимости с использованием стандартов.
Полимеразная цепная реакция относится к молекулярно-генетическим методам и выявляет специфические последовательности нуклеиновых кислот. Масс-спектрометрия основана на разделении и регистрации ионов по отношению массы к заряду. Нефелометрия непосредственно измеряет рассеяние света частицами; она может использоваться в иммунологическом варианте — иммунонефелометрии, однако в представленном перечне именно ИФА является наиболее прямым и общепринятым примером иммуннохимического метода.
| Метод | Основной принцип | Определяемый объект | Тип регистрируемого сигнала |
|---|---|---|---|
| Иммуноферментный анализ | Специфическое связывание антигена и антитела с ферментной меткой | Антигены, антитела, гормоны, белки, инфекционные маркеры | Интенсивность окраски субстрата, измеряемая фотометрически |
| Иммунонефелометрия | Образование иммунных комплексов с последующим измерением рассеяния света | Преимущественно иммуноглобулины и белки плазмы | Интенсивность рассеянного света |
| Полимеразная цепная реакция | Многократная ферментативная амплификация заданного участка ДНК или кДНК | Нуклеиновые кислоты микроорганизмов, генов и мутаций | Флуоресцентный сигнал или электрофоретическая полоса |
| Масс-спектрометрия | Ионизация соединений и разделение ионов по отношению массы к заряду | Метаболиты, лекарственные вещества, пептиды, белки | Масс-спектр и интенсивность ионных пиков |
| Радиоиммунный анализ | Конкурентное связывание аналита и меченого антигена с ограниченным количеством антител | Гормоны и другие вещества в низких концентрациях | Радиоактивность иммунного комплекса |
ИФА сочетает иммунологическую специфичность реакции антиген–антитело с ферментативным усилением аналитического сигнала. Метод может выполняться в качественном, полуколичественном и количественном форматах. Для получения достоверного результата важны правильный выбор калибраторов, контрольные образцы и учет возможных перекрестных реакций. Таким образом, иммуноферментный анализ обоснованно относится к иммуннохимическим лабораторным методам.