2) реакция микроагглютинации
3) реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации
4) нитросиний тетразолий-тест (+)
Нитросиний тетразолий-тест (NBT-тест) оценивает способность гранулоцитов к респираторному взрыву — резкому усилению потребления кислорода и образованию активных форм кислорода после активации клетки. Под действием супероксидного анион-радикала бесцветно-жёлтый нитросиний тетразолий восстанавливается до нерастворимого тёмно-синего формазана, который выявляется в цитоплазме нейтрофилов микроскопически. Поэтому результат отражает функциональное состояние NADPH-оксидазной системы и кислородзависимого механизма бактерицидности.
При врождённых дефектах NADPH-оксидазы, прежде всего при хронической гранулематозной болезни, образование активных форм кислорода резко снижено или отсутствует: после стимуляции гранулоциты не окрашиваются формазаном либо доля положительных клеток значительно уменьшена. В норме после активации увеличивается число NBT-положительных нейтрофилов. Исследование может выполняться в спонтанном и стимулированном вариантах, а диагностически значимым показателем является процент клеток, восстановивших тетразолий.
Остальные перечисленные реакции предназначены преимущественно для выявления антител, антигенов или активности комплемента и не характеризуют внутриклеточную генерацию активных форм кислорода фагоцитами. В современной практике для более точной количественной оценки окислительного взрыва часто используют тест с дигидрородамином 123 и проточной цитометрией, однако классическим скрининговым методом остаётся NBT-тест.
| Метод или показатель | Что оценивает | Основной диагностический признак |
|---|---|---|
| NBT-тест, стимулированный вариант | Способность нейтрофилов к образованию супероксидного аниона | Появление тёмно-синего формазана в активированных клетках |
| NBT-тест, спонтанный вариант | Базовую метаболическую активность гранулоцитов без дополнительной стимуляции | Обычно выявляется небольшая доля положительных клеток; выраженное повышение возможно при воспалении |
| Хроническая гранулематозная болезнь | Наследственный дефект NADPH-оксидазы | Резкое снижение или отсутствие NBT-положительных нейтрофилов после стимуляции |
| Тест с дигидрородамином 123 | Окислительный взрыв гранулоцитов методом проточной цитометрии | Количественно определяет изменение флуоресценции и может выявлять носительство X-сцепленного дефекта |
| Реакция связывания комплемента | Наличие антител и способность иммунных комплексов фиксировать комплемент | Не оценивает генерацию активных форм кислорода фагоцитами |
| Реакции агглютинации и пассивной гемагглютинации | Взаимодействие антигена с антителом, иногда после адсорбции антигена на эритроцитах | Характеризуют гуморальный иммунный ответ, а не бактерицидность гранулоцитов |
NBT-тест является функциональным исследованием клеточного иммунитета и применяется для скрининга нарушений окислительного метаболизма фагоцитов. Отрицательный или резко сниженный результат требует подтверждения более специфичным методом, прежде всего проточной цитометрией с дигидрородамином. Интерпретация должна учитывать способ стимуляции клеток, процент положительных нейтрофилов и клинические признаки рецидивирующих инфекций.