2) Граму
3) Цилю-Нильсену (+)
4) Нейссеру
Микобактерии туберкулёза выявляют окраской по Цилю–Нильсену, поскольку их клеточная стенка богата липидами, прежде всего миколовыми кислотами и восковыми компонентами. Эти вещества препятствуют проникновению обычных водных красителей и обеспечивают кислотоустойчивость бактерий. При классической методике карболовый фуксин проникает в клеточную стенку при нагревании, после чего окраска сохраняется даже при обработке кислотно-спиртовым раствором; докраска метиленовым синим создаёт контрастный фон.
В результате микобактерии обнаруживаются как тонкие красные или малиновые палочки на синем фоне. Кислотоустойчивость является важным диагностическим признаком, однако отрицательный результат микроскопии не исключает туберкулёз при низкой бактериальной нагрузке. Окраска по Граму для микобактерий малопригодна из-за особенностей липидной клеточной стенки, а методы Леффлера и Нейссера предназначены преимущественно для других диагностических задач.
| Метод окраски | Основное назначение | Результат для микобактерий туберкулёза | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Циль–Нильсен | Выявление кислотоустойчивых бактерий | Красные палочки на синем фоне | Классический метод обнаружения кислотоустойчивых микобактерий в мокроте и другом материале |
| Модифицированный Циль–Нильсен | Окраска без интенсивного нагревания или с изменением этапов обесцвечивания | Сохраняется красная окраска кислотоустойчивых клеток | Применяется в отдельных лабораторных протоколах, особенно при исследовании клинического материала |
| Аурамин–родамин | Флуорохромная микроскопия кислотоустойчивых бактерий | Светящиеся жёлто-зелёные палочки на тёмном фоне | Более высокая производительность и чувствительность скрининга по сравнению с обычной световой микроскопией |
| Грам | Разделение бактерий по строению клеточной стенки | Окрашивание слабое, вариабельное или недостаточно информативное | Не является основным методом подтверждения микобактериальной инфекции |
| Нейссер | Выявление метахроматических зёрен, особенно у Corynebacterium diphtheriae | Не используется для специфического выявления M. tuberculosis | Имеет значение главным образом при диагностике коринебактериальных инфекций |
| Леффлер | Простая окраска или использование щелочного метиленового синего для оценки бактериальных клеток | Не обеспечивает надёжного выявления кислотоустойчивости | Не относится к стандартным методам диагностики туберкулёза |
Обнаружение кислотоустойчивых палочек в мазке подтверждает наличие микобактерий, но не позволяет достоверно отличить M. tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий. Для видовой идентификации и определения лекарственной устойчивости применяют культуральные и молекулярно-генетические методы. Наиболее значимыми современными подходами являются микроскопия с флуорохромами, посев на специальные среды и тесты амплификации нуклеиновых кислот.