2) гексокиназный (+)
3) преобразования меди по Бенедикту
4) ортотолуидиновый
Гексокиназный метод считается высокоспецифичным референсным подходом к определению концентрации глюкозы в крови. На первом этапе глюкоза фосфорилируется гексокиназой с затратой АТФ и образованием глюкозо-6-фосфата. Затем глюкозо-6-фосфат под действием глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы окисляется, при этом образуется восстановленный кофермент NADH или NADPH. Его концентрацию измеряют фотометрически при длине волны около 340 нм; величина оптической плотности прямо пропорциональна содержанию глюкозы в пробе.
Высокая специфичность обеспечивается последовательностью ферментативных реакций: в аналитический сигнал преимущественно вносит вклад именно глюкоза, а не большинство других восстанавливающих или окрашенных компонентов биоматериала. Глюкозооксидазная методика также основана на ферментативном распознавании глюкозы, но ее результат может зависеть от содержания кислорода и веществ, влияющих на образование или определение перекиси водорода. Реакции восстановления меди и ортотолуидиновая проба выявляют более широкий спектр восстанавливающих сахаров и соединений, поэтому обладают меньшей аналитической специфичностью и в настоящее время имеют преимущественно историческое или учебное значение.
| Метод | Основной принцип | Специфичность и аналитическая характеристика | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Гексокиназный | Фосфорилирование глюкозы с последующим окислением глюкозо-6-фосфата и регистрацией NAD(P)H | Очень высокая; минимальное влияние большинства других сахаров и восстанавливающих веществ | Референсный и сравнительный метод для лабораторного определения гликемии |
| Глюкозооксидазный | Окисление глюкозы до глюконовой кислоты с образованием перекиси водорода | Высокая ферментативная селективность, но возможны интерференции со стороны аскорбата, урата, билирубина, кислорода | Применяется в лабораторных анализаторах и тест-системах, но не является наиболее специфичным вариантом |
| Глюкозодегидрогеназный | Окисление глюкозы с восстановлением кофермента или медиатора электронов | Зависит от типа фермента и кофермента; некоторые системы реагируют на мальтозу, галактозу и другие сахара | Широко используется в портативных глюкометрах; требует оценки конкретной тест-системы |
| Медь-восстановительный | Восстановление ионов Cu2+ до Cu+ в щелочной среде | Низкая специфичность: реакцию вызывают различные восстанавливающие сахара и соединения | Классический химический метод, в современной диагностике практически не используется |
| Ортотолуидиновый | Образование окрашенного продукта взаимодействия ортотолуидина с альдегидной группой глюкозы в кислой среде | Недостаточная специфичность, зависимость от матричных примесей; реагент обладает токсичностью | Устаревшая методика, вытесненная ферментативными способами |
| Электрохимический биосенсор | Измерение электрического сигнала, возникающего при ферментативном превращении глюкозы | Зависит от фермента, медиатора, калибровки и влияния компонентов цельной крови | Используется для экспресс- и самоконтроля, но результаты требуют сопоставления с лабораторным методом |
Для диагностики нарушений углеводного обмена важны не только выбранный аналитический метод, но и тип образца, сроки отделения плазмы и соблюдение преаналитических условий. Замедление гликолиза в цельной крови может привести к искусственному снижению измеренной концентрации глюкозы. Поэтому референсные значения и диагностические пороги должны оцениваться в стандартизированных условиях, преимущественно при исследовании венозной плазмы. Гексокиназный метод обеспечивает необходимую воспроизводимость и сопоставимость результатов между лабораториями.