2) NGS
3) ПЦР
4) FISH (+)
При промежуточном результате иммуногистохимического исследования HER2 (обычно 2+) необходимо уточнить наличие амплификации гена ERBB2, кодирующего рецептор HER2. Оптимальным методом является флуоресцентная in situ-гибридизация (FISH) — разновидность in situ-гибридизации, позволяющая непосредственно подсчитать сигналы локуса HER2 в ядрах опухолевых клеток и сопоставить их с сигналами центромерного участка хромосомы 17 (CEP17).
Ключевым диагностическим показателем при двухцветной FISH является соотношение HER2/CEP17 и среднее число копий HER2 на ядро. Амплификация подтверждается при увеличении числа копий гена, часто с формированием кластеров флуоресцентных сигналов; интерпретация выполняется по актуальным критериям для конкретной опухоли, с учетом качества материала и результатов ИГХ. FISH имеет особое значение потому, что оценивает именно генетическое событие, тогда как ИГХ отражает уровень экспрессии белка HER2.
| Метод | Что определяется | Основная диагностическая роль при HER2 | Ограничения |
|---|---|---|---|
| ИГХ | Мембранная экспрессия белка HER2 | Первичный скрининг и оценка интенсивности окрашивания | Промежуточный результат 2+ не позволяет надежно установить амплификацию |
| FISH | Число копий гена HER2 и хромосомы 17 | Референтное подтверждение или исключение амплификации при неопределенной ИГХ | Требует флуоресцентного микроскопа и стандартизированного подсчета сигналов |
| Двухзондовая ISH | HER2 и контрольный локус CEP17 в одной реакции | Расчет соотношения HER2/CEP17 и классификация статуса HER2 | Необходима оценка достаточного числа инвазивных опухолевых клеток |
| ПЦР | Количество фрагментов ДНК HER2 в экстрагированной ткани | Возможное молекулярное исследование амплификации | Теряется пространственная связь сигнала с морфологически верифицированными клетками опухоли |
| NGS | Широкий спектр генетических нарушений, включая копийность HER2 | Комплексное профилирование опухоли и выявление сопутствующих изменений | Не является стандартным рефлексным тестом для типичного результата ИГХ 2+ |
| ИФА | Концентрация антигена или антитела в биологическом материале | Не используется для прямого определения амплификации HER2 в опухолевых клетках | Не оценивает число копий гена и их внутриклеточную локализацию |
Таким образом, FISH является методом выбора для верификации статуса HER2 при неопределенном результате ИГХ. Положительный результат свидетельствует о геномной амплификации ERBB2 и может определять возможность таргетной анти-HER2-терапии в соответствующем клиническом контексте. Отрицательный результат FISH при ИГХ 2+ указывает на отсутствие подтвержденной амплификации и требует интерпретации по действующим диагностическим алгоритмам.