2) соединительную ткань
3) амилоид
4) железо
Метиленовый синий выявляет гликозаминогликаны, прежде всего кислые мукополисахариды основного вещества соединительной ткани. К этой группе относятся гиалуроновая кислота, хондроитинсульфаты, дерматансульфат и другие полисахариды, содержащие карбоксильные или сульфатные группы. В тканях они входят в состав внеклеточного матрикса хряща, сосудистых стенок, слизистых оболочек и соединительной ткани.
Механизм окраски основан на электростатическом взаимодействии катионного красителя с анионными группами гликозаминогликанов. В результате участки, богатые этими веществами, приобретают синюю окраску; при высокой концентрации полисахаридов возможно явление метахромазии — изменение оттенка красителя в сторону фиолетово-сиреневого. Интенсивность реакции зависит от pH среды, степени сульфатирования и количества кислых групп в субстрате.
Окраска метиленовым синим имеет гистохимическое, а не абсолютно специфическое значение, поэтому результат оценивают с учётом локализации и морфологической картины. Она помогает обнаружить накопление кислых мукополисахаридов при микседеме, мукоидном и фибриноидном набухании, в хрящевой ткани и слизистых секретах. Для дифференциальной диагностики применяют дополнительные реакции, позволяющие отличить гликозаминогликаны от амилоида, железа, коллагена и нейтральных углеводных компонентов.
| Метод окраски | Основная мишень | Диагностический признак |
|---|---|---|
| Метиленовый синий | Кислые гликозаминогликаны | Синее окрашивание, иногда метахромазия до фиолетово-сиреневого оттенка |
| Альциановый синий, pH 2,5 | Кислые муцины и гликозаминогликаны | Стабильное синее окрашивание карбоксилированных и сульфатированных полисахаридов |
| Толуидиновый синий | Сульфатированные гликозаминогликаны | Выраженная метахромазия в участках высокой концентрации кислых полисахаридов |
| Шифф-реакция, PAS | Нейтральные мукополисахариды, гликопротеины, базальные мембраны | Малиново-пурпурное окрашивание; реакция не специфична для гликозаминогликанов |
| Конго красный | Амилоид | Красно-розовое окрашивание и яблочно-зелёное двулучепреломление в поляризованном свете |
| Реакция Перлса | Трёхвалентное железо в составе гемосидерина | Образование зернистого или диффузного берлинского синего цвета |
| Трихромные методы, например окраска по Массону | Коллагеновые волокна и соединительная ткань | Контрастное окрашивание коллагена, мышечных волокон и ядер; не является реакцией на гликозаминогликаны |
Таким образом, положительная реакция с метиленовым синим указывает на наличие кислых компонентов межклеточного матрикса. В практической морфологии она особенно информативна при оценке мукоидных изменений и слизистых веществ. Для уточнения природы выявленного субстрата могут использоваться ферментативные контроли, например обработка гиалуронидазой, а также сочетание с альциановым синим и PAS-реакцией. Идентификация амилоида или железа требует принципиально иных специальных методов.