2) величины пропускания T исследуемого вещества от его концентрации в стандартных градуировочных растворах
3) оптической плотности Аст поглощения исследуемого вещества от его концентрации в стандартных градуировочных растворах (+)
4) оптической плотности Аст поглощения исследуемого вещества от его массы m в стандартных градуировочных растворах
Градуировочная характеристика представляет собой зависимость средних значений оптической плотности стандартных градуировочных растворов от известных концентраций определяемого вещества. Для каждой точки используют раствор с заранее установленной концентрацией и проводят одно или несколько измерений, после чего рассчитывают среднее значение Aст. По полученным данным строят градуировочный график или рассчитывают уравнение регрессии, которое в дальнейшем применяют для определения содержания вещества в неизвестной пробе.
В основе метода лежит закон Бугера—Ламберта—Бера: при соблюдении линейного диапазона оптическая плотность пропорциональна концентрации вещества, длине оптического пути и коэффициенту поглощения (A = εlc). Оптическая плотность пробы Aпр является уже измеренным результатом для неизвестного объекта и используется для обратного расчёта его концентрации по градуировочной зависимости. Величина пропускания T связана с оптической плотностью соотношением A = −lgT, но не является основной формой представления данной градуировочной характеристики.
Таким образом, именно концентрация стандартных растворов служит независимой переменной, а средняя оптическая плотность Aст — измеряемым откликом системы. Масса вещества может использоваться только в специальных методиках, где градуирование проводят по абсолютному количеству аналита, однако для обычного фотометрического определения характеристику строят по концентрации. Усреднение повторных измерений уменьшает влияние случайной погрешности и повышает надёжность калибровочной зависимости.
| Параметр | Роль в фотометрическом анализе | Диагностическое или методическое значение |
|---|---|---|
| Aст | Средняя оптическая плотность стандартного раствора | Формирует экспериментальные точки градуировочного графика |
| Cст | Известная концентрация вещества в стандарте | Независимая переменная, относительно которой строят градуировочную зависимость |
| Aпр | Оптическая плотность исследуемой лабораторной пробы | По этому значению находят неизвестную концентрацию с использованием уравнения калибровки |
| T | Доля прошедшего через раствор светового потока | Может быть исходно измерена прибором, но обычно преобразуется в оптическую плотность |
| m | Масса аналита в стандартном растворе | Не заменяет концентрацию, если объём раствора или условия пробоподготовки различаются |
| Закон Бугера—Ламберта—Бера | Связь оптической плотности с концентрацией, длиной кюветы и коэффициентом поглощения | Обеспечивает линейность градуировки только в установленном рабочем диапазоне |
| Среднее значение измерений | Статистическая обработка повторных определений | Снижает влияние случайной погрешности и повышает воспроизводимость результата |
Качество градуировочной характеристики оценивают по линейности, коэффициенту корреляции или детерминации, величине свободного члена и стабильности контрольных растворов. Измеренная оптическая плотность пробы должна находиться в пределах рабочего диапазона калибровки; при превышении диапазона раствор разбавляют и учитывают коэффициент разбавления. Обязательны холостой опыт, контрольные образцы и соблюдение одинаковых условий измерения для стандартов и исследуемых проб.