2) водой, подкисленной виннокаменной кислоты раствором 10%; хлороформом при рН 9
3) этанолом, подкисленным щавелевой кислоты раствором 10%; эфиром при рН 13 (+)
4) ацетоном, подкисленным уксусной кислоты раствором 5%; этанолом при рН 2
Производные фенотиазина представляют собой липофильные органические основания, поэтому их селективное выделение из биологического материала основано на изменении степени ионизации в зависимости от pH среды. На первом этапе ткань обрабатывают этанолом, подкисленным 10% раствором щавелевой кислоты. В кислой среде основные атомы азота фенотиазиновых соединений протонируются с образованием солей, хорошо переходящих из ткани в полярную спиртовую фазу.
После первичного извлечения среду резко подщелачивают до pH около 13. При таком pH фенотиазины преимущественно переходят в неионизированную форму свободных оснований, которая значительно лучше растворяется в малополярных органических растворителях. Последующая экстракция эфиром обеспечивает концентрирование фенотиазиновых производных в органической фазе и одновременно уменьшает содержание многих полярных компонентов биологической матрицы.
Таким образом, метод сочетает кислотно-основное перераспределение вещества между фазами и различия в растворимости ионизированной и молекулярной форм. Такая схема особенно пригодна для токсикологического анализа лекарственных веществ основного характера, к которым относятся многие антипсихотические производные фенотиазина, включая хлорпромазин, промазин и левомепромазин.
| Этап или признак | Характеристика | Аналитическое значение |
|---|---|---|
| Химическая природа | Фенотиазины являются преимущественно слабыми органическими основаниями | Позволяет управлять их ионизацией изменением pH |
| Первичная обработка | Подкисленный щавелевой кислотой этанол | Разрушает связи с тканевой матрицей и переводит основания в растворимые соли |
| Кислая среда | Преобладает протонированная, ионизированная форма | Повышается растворимость фенотиазинов в полярной фазе |
| Подщелачивание | Доведение среды примерно до pH 13 | Соли превращаются в свободные неионизированные основания |
| Экстракция эфиром | Свободные основания переходят в органический растворитель | Обеспечивается концентрирование исследуемых соединений |
| Селективность метода | Используются различия в кислотно-основных и липофильных свойствах компонентов ткани | Снижается влияние полярных эндогенных примесей |
| Последующий анализ | Органический экстракт исследуют химическими или инструментальными методами | Возможны идентификация и количественное определение фенотиазинов |
Эффективность такого изолирования определяется прежде всего правильным подбором pH на каждом этапе. В кислой среде фенотиазины удерживаются в полярной фазе в виде солей, тогда как после сильного подщелачивания возрастает их сродство к органическому растворителю. Полученный эфирный экстракт может использоваться для дальнейшего хроматографического или спектрометрического исследования. Кислотно-основная экстракция тем самым служит не только способом выделения, но и важным этапом очистки токсикологической пробы.