2) в зависимости от их изоэлектрической точки
3) в зависимости от их молекулярного веса
4) в зависимости от их строения
Разделение белковых молекул методом электрофореза происходит под действием внешнего электрического поля. В буферном растворе белки приобретают суммарный электрический заряд и перемещаются к электроду противоположного знака. Скорость и направление миграции определяются величиной заряда белка, pH среды, размером и пространственной конфигурацией молекулы, а также свойствами носителя.
В судебно-биологической и клинико-лабораторной практике электрофорез применяют для исследования белков сыворотки крови, гемоглобина, ферментов и других биологических маркеров. Изоэлектрическая точка и молекулярная масса могут влиять на разделение, однако они становятся основными критериями только в специальных разновидностях метода: изоэлектрическом фокусировании и электрофорезе в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия соответственно.
| Метод | Основной принцип разделения | Диагностическое применение |
|---|---|---|
| Зональный электрофорез | Различная скорость миграции заряженных белков в электрическом поле | Разделение белков сыворотки на альбумин и глобулиновые фракции |
| Электрофорез в агарозном геле | Зависимость подвижности преимущественно от заряда и частично от размера молекул | Исследование гемоглобинов, липопротеинов и сывороточных белков |
| Нативный ПААГ-электрофорез | Учитываются заряд, молекулярная масса и пространственная форма белка | Оценка белковых комплексов и изоферментов |
| SDS-ПААГ-электрофорез | Разделение денатурированных белков преимущественно по молекулярной массе | Определение относительной молекулярной массы белковых компонентов |
| Изоэлектрическое фокусирование | Перемещение белка до зоны pH, соответствующей его изоэлектрической точке | Выявление изоформ белков и олигоклональных иммуноглобулинов |
| Иммунофиксация | Электрофоретическое разделение с последующей реакцией со специфическими антителами | Идентификация моноклональных иммуноглобулинов |
Таким образом, обязательным физическим условием электрофоретического разделения является наличие разности потенциалов, создающей направленное движение заряженных частиц. Полученный профиль белковых фракций оценивают по положению, интенсивности и ширине зон. В экспертной практике результаты интерпретируют только с учетом характеристик исследуемого материала, выбранной методики и контрольных образцов. Нарушение условий буферной системы или напряжения может изменить подвижность белков и привести к ошибочной оценке электрофореграммы.