2) подщелачиванием водного раствора 50% NaOH до рН 13, экстракцией эфиром 2-3 раза и последующей реэкстракцией в 0,5М H2SO4 (+)
3) осаждением их в виде комплексных соединений
4) экстракцией смеси хлороформ-н-бутанола при рН 7-8
В методе Е. М. Саломатина фенотиазины выделяют жидкость–жидкостной экстракцией с предварительным подщелачиванием исследуемого водного раствора 50% раствором гидроксида натрия до pH 13. Фенотиазины относятся к слабым органическим основаниям; в резко щелочной среде они преимущественно находятся в неионизированной форме. Такая форма обладает большей липофильностью и извлекается диэтиловым эфиром, поэтому экстракцию проводят 2–3 раза для повышения полноты выделения.
Эфирный экстракт затем подвергают реэкстракции в 0,5 М серную кислоту. В кислой среде основные азотсодержащие группы фенотиазинов протонируются, и вещества переходят в водорастворимые соли, что обеспечивает их концентрирование и очистку от нейтральных примесей. Подкисление исходного раствора, напротив, переводит фенотиазины в ионизированное состояние и препятствует их переходу в эфир; осаждение комплексных соединений и экстракция смесью хлороформа с н-бутанолом при pH 7–8 не соответствуют данному классическому алгоритму.
| Этап или условие | Преимущественная форма вещества | Распределение | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|
| Исходная водная вытяжка | Смесь ионизированных и неионизированных соединений | Фенотиазины находятся в водной фазе вместе с сопутствующими веществами | Требуется перевод оснований в форму, пригодную для экстракции |
| Подщелачивание 50% NaOH до pH 13 | Преимущественно свободные основания | Снижается растворимость в воде и повышается липофильность | Создаются условия для количественного извлечения в эфир |
| Экстракция диэтиловым эфиром 2–3 раза | Неионизированная липофильная форма | Переход фенотиазинов в эфирную фазу | Многократная экстракция уменьшает потери и повышает выход |
| Реэкстракция 0,5 М H2SO4 | Протонированные соли фенотиазинов | Возврат веществ из эфира в кислую водную фазу | Концентрирование и дополнительное отделение нейтральных примесей |
| Подкисление исходного раствора до pH 2–3 | Ионизированная, водорастворимая форма | Преимущественно сохраняется в водной фазе | Экстракция эфиром становится неэффективной |
| Экстракция при pH 7–8 смесью хлороформа и н-бутанола | Часть соединений ионизирована, часть — в свободной форме | Неполное и менее селективное распределение | Не является специфическим этапом метода Саломатина |
Таким образом, основу метода составляет последовательное использование кислотно-основных свойств фенотиазинов и их различной растворимости в водной и органической фазах. Щелочная экстракция выделяет свободные основания, а последующая кислая реэкстракция переводит их в стабильные водорастворимые соли. Такая схема одновременно повышает чувствительность исследования и уменьшает влияние матричных примесей биологического материала. Полученный кислый экстракт далее может использоваться для подтверждающей идентификации фенотиазинов инструментальными или цветными реакциями.