2) обработку сухого остатка абсолютным этанолом
3) экстракцию водного раствора эфиром при рН 9-10, экстракт отбрасывают
4) экстракцию водного раствора эфиром при рН 2-3, экстракт отбрасывают (+)
Правильным является удаление сопутствующих веществ экстракцией диэтиловым эфиром из водного раствора при pH 2–3 с последующим отбрасыванием эфирной фазы. Метод Е. М. Саломатина предназначен для изолирования производных фенотиазина, содержащих основный атом азота. В сильнокислой среде эти соединения преимущественно протонируются и переходят в ионизированную форму, хорошо растворимую в воде и плохо распределяющуюся в неполярный органический растворитель.
При обработке кислого водного раствора эфиром в органическую фазу переходят преимущественно нейтральные и слабокислые липофильные компоненты биологической матрицы, продукты разложения тканей и другие экстрактивные примеси. Целевые фенотиазины в виде катионов остаются в водной фазе, поэтому эфирный экстракт на данном этапе отбрасывают. Такая операция представляет собой селективную очистку, основанную на управлении степенью ионизации вещества изменением pH.
После очистки водную фазу сильно подщелачивают: фенотиазины превращаются в неионизированные основания и становятся способными экстрагироваться эфиром. Поэтому проведение экстракции при щелочном pH с последующим отбрасыванием органической фазы привело бы к потере значительной части определяемых соединений. Полученные эфирные извлечения далее могут подвергаться реэкстракции раствором серной кислоты, при которой фенотиазины вновь образуют водорастворимые соли.
| Этап или условие | Форма производных фенотиазина | Преимущественная фаза | Аналитическое значение |
|---|---|---|---|
| Подкисление до pH 2–3 | Протонированный катион | Водная | Удержание целевых соединений в растворе |
| Экстракция эфиром при pH 2–3 | Ионизированная | Остается в водной фазе | Удаление нейтральных и липофильных примесей |
| Отбрасывание кислого эфирного экстракта | Практически отсутствует в эфире | Сохраняется водная фаза | Снижение матричных помех без существенной потери аналита |
| Подщелачивание раствором NaOH | Неионизированное свободное основание | Получает сродство к органической фазе | Подготовка к целевой экстракции фенотиазинов |
| Экстракция эфиром в щелочной среде | Молекулярная форма | Эфирная | Выделение и концентрирование определяемых веществ |
| Реэкстракция раствором серной кислоты | Водорастворимая соль | Кислый водный реэкстракт | Получение очищенного раствора для идентификации |
Эффективность метода определяется последовательным изменением коэффициента распределения фенотиазинов между водной и органической фазами. Кислая экстракция выполняет функцию очистки, а щелочная — функцию непосредственного выделения целевых соединений. Точное поддержание pH особенно важно, поскольку неполное протонирование или недостаточное подщелачивание снижает селективность и степень извлечения. Полученный очищенный экстракт используют для дальнейшего хроматографического, спектрального или иного химико-токсикологического подтверждения.