2) ОТ-ПЦР, МФА (+)
3) секвенирование
4) реакцию микронейтрализации
Для экспресс-диагностики гриппа применяют ОТ-ПЦР и метод флуоресцирующих антител (МФА). ОТ-ПЦР включает обратную транскрипцию вирусной РНК в комплементарную ДНК и последующую амплификацию специфических участков генома вируса гриппа; обнаружение ампликона свидетельствует о наличии вирусного генетического материала в исследуемом образце. Метод обладает высокой аналитической чувствительностью и специфичностью, поэтому используется как основной лабораторный способ подтверждения инфекции, особенно при низкой вирусной нагрузке.
МФА выявляет антигены вируса в эпителиальных клетках мазка из носоглотки с помощью меченых флуорохромом специфических антител. Результат может быть получен в течение короткого времени, что соответствует задаче экспресс-диагностики, однако чувствительность метода обычно ниже, чем у молекулярных тестов, и зависит от качества забора материала, сроков заболевания и сохранности клеток. Наиболее информативно исследование образцов, взятых в первые дни болезни, когда концентрация вируса в дыхательных путях максимальна.
Реакция торможения гемагглютинации и реакция микронейтрализации относятся преимущественно к серологическим методам: они оценивают антитела в сыворотке и требуют исследования парных сывороток в динамике, поэтому не подходят для быстрого подтверждения текущей инфекции. Секвенирование предназначено главным образом для генотипирования, выявления мутаций и эпидемиологического надзора, а не для первичной экспресс-диагностики.
| Метод | Что выявляет | Материал | Практическое значение | Ограничения |
|---|---|---|---|---|
| ОТ-ПЦР | РНК вируса после обратной транскрипции и амплификации | Мазок из носоглотки, носа или ротоглотки | Высокочувствительное и специфичное подтверждение инфекции | Требует оборудования, реагентов и соблюдения технологии |
| МФА | Вирусные антигены в инфицированных эпителиальных клетках | Клеточный материал из дыхательных путей | Быстрое выявление антигена при достаточной вирусной нагрузке | Чувствительность ниже, чем у ОТ-ПЦР; результат зависит от качества образца |
| РТГА | Антитела, блокирующие гемагглютинацию вируса | Сыворотка крови | Серологическая оценка иммунного ответа и динамики антител | Не позволяет быстро подтвердить раннюю инфекцию по одной сыворотке |
| Реакция микронейтрализации | Функционально нейтрализующие антитела | Сыворотка крови | Оценка постинфекционного или поствакцинального иммунитета | Трудоёмкий серологический метод, не предназначенный для экспресс-тестирования |
| Секвенирование | Нуклеотидную последовательность генома вируса | Положительный клинический образец или выделенный вирус | Типирование, филогенетический анализ, мониторинг мутаций | Более длительное и сложное исследование, чем рутинная ПЦР |
| Экспресс-тесты на антиген | Белковые антигены вируса | Мазок из дыхательных путей | Быстрый результат у пациента с выраженной вирусной нагрузкой | Отрицательный результат не исключает грипп и может требовать ОТ-ПЦР |
Таким образом, сочетание ОТ-ПЦР и МФА соответствует принципу прямого выявления возбудителя или его компонентов в клиническом материале. При отрицательном результате МФА, но сохраняющемся клиническом подозрении предпочтительно выполнить ОТ-ПЦР. Серологические реакции и секвенирование имеют важное специальное значение, но используются для иных диагностических и эпидемиологических задач.