2) РИФ (+)
3) иммуногистохимии
4) ИФА
Реакция иммунофлуоресценции, точнее прямая флуоресцентная диагностика (РИФ, DFA/FAT), считается эталонным методом посмертного подтверждения бешенства. Исследуют мазки-отпечатки свежей ткани головного мозга, преимущественно из ствола мозга, мозжечка и аммонова рога. Метод позволяет непосредственно выявить антиген вируса бешенства в инфицированных нейронах и рекомендован Всемирной организацией здравоохранения как золотой стандарт .
При прямой РИФ препарат обрабатывают антителами к антигенам лиссавируса, меченными флуорохромом. После связывания антител с вирусным нуклеопротеином при люминесцентной микроскопии обнаруживается характерное яркое гранулярное свечение в цитоплазме нервных клеток и их отростках. Диагностическая ценность метода обусловлена быстрым получением результата, высокой специфичностью и возможностью выявлять вирусный антиген без предварительного культивирования возбудителя.
Молекулярные и иммуногистохимические методы дополняют РИФ, особенно при неудовлетворительном качестве материала, исследовании фиксированных тканей или прижизненной диагностике. У живого пациента одного исследования недостаточно: обычно анализируют несколько образцов, включая слюну методом ОТ-ПЦР, биоптат кожи затылка, сыворотку крови и спинномозговую жидкость. Отрицательный результат отдельного прижизненного теста не исключает инфекцию, поэтому лабораторные данные оценивают в комплексе.
| Метод | Определяемый маркер | Основной материал | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Прямая РИФ | Вирусный антиген в нейронах | Свежая ткань головного мозга | Эталонное посмертное подтверждение бешенства |
| ОТ-ПЦР | РНК лиссавируса | Слюна, кожа, ткань мозга | Высокочувствительное дополнение к антигенным методам; особенно важно при прижизненном обследовании |
| Иммуногистохимия | Антиген вируса | Фиксированная ткань головного мозга | Применяется, когда материал зафиксирован формалином или РИФ технически недоступна |
| ИФА | Антитела либо вирусные антигены | Сыворотка, ликвор или иной биоматериал | Имеет вспомогательное значение и не заменяет прямое исследование ткани мозга |
| Выявление вируснейтрализующих антител | Специфические нейтрализующие антитела | Сыворотка и спинномозговая жидкость | Поддерживает прижизненный диагноз; интерпретация зависит от предшествующей вакцинации |
| Гистологическое исследование | Тельца Негри и морфологические изменения | Ткань головного мозга | Недостаточно чувствительно для самостоятельного исключения бешенства |
Качество РИФ зависит от правильного отбора нескольких анатомических отделов головного мозга и сохранности вирусного антигена. Исследование только одного участка может привести к ложноотрицательному результату из-за неравномерного распределения возбудителя. При сомнительной флуоресцентной картине результат уточняют молекулярным или другим валидированным методом. Лабораторное подтверждение не должно задерживать экстренную постконтактную профилактику у человека после эпидемиологически значимого контакта.