2) взаимодействии антигена и антитела
3) полимеризации молекул
4) образовании иммунных комплексов
Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) основана на многократной амплификации, то есть избирательном увеличении числа копий определённого участка ДНК. Специфичность реакции обеспечивается праймерами — короткими олигонуклеотидными последовательностями, комплементарными границам исследуемого фрагмента. Поэтому ПЦР позволяет выявлять даже небольшое количество генетического материала возбудителя в клиническом образце.
Амплификация проходит циклически и включает денатурацию ДНК, отжиг праймеров и синтез новых цепей с помощью термостабильной ДНК-полимеразы. При каждом цикле количество целевых копий теоретически удваивается, что обеспечивает высокую аналитическую чувствительность метода. Если исследуется РНК-содержащий вирус, перед амплификацией выполняют обратную транскрипцию с образованием комплементарной ДНК; такой вариант называют ОТ-ПЦР или RT-PCR.
В зависимости от формата ПЦР может применяться для качественного обнаружения нуклеиновой кислоты, количественной оценки вирусной нагрузки или одновременного выявления нескольких мишеней. Результат интерпретируют с учётом положительного и отрицательного контролей, качества образца и порогового цикла в режиме реального времени. Таким образом, правильным является вариант, указывающий на амплификацию специфических участков ДНК; взаимодействие антигена с антителом и образование иммунных комплексов относятся к серологическим, а не молекулярно-генетическим методам.
| Вариант метода | Исследуемый материал | Основной принцип | Диагностическое применение |
|---|---|---|---|
| Классическая ПЦР | ДНК | Амплификация целевого фрагмента с последующей детекцией продукта | Качественное выявление ДНК микроорганизма |
| ОТ-ПЦР (RT-PCR) | РНК | Обратная транскрипция РНК в кДНК, затем её амплификация | Диагностика инфекций, вызванных РНК-содержащими вирусами |
| ПЦР в реальном времени (qPCR) | ДНК или кДНК | Регистрация накопления ампликона во время каждого цикла по флуоресцентному сигналу | Определение наличия мишени и количественная оценка вирусной нагрузки |
| Мультиплексная ПЦР | ДНК или кДНК | Одновременная амплификация нескольких мишеней с разными праймерами | Параллельное выявление нескольких возбудителей или генов |
| Гнездная ПЦР | ДНК или кДНК | Два последовательных раунда амплификации с внутренними праймерами | Повышение чувствительности и специфичности при малом количестве мишени |
| Цифровая ПЦР | ДНК или кДНК | Разделение образца на множество микрореакций с последующим подсчётом положительных и отрицательных реакций | Абсолютная количественная оценка нуклеиновой кислоты и выявление низкочастотных вариантов |
Положительный результат ПЦР свидетельствует об обнаружении генетического материала, но не всегда доказывает наличие жизнеспособного вируса. Ложноотрицательные результаты возможны при низкой концентрации мишени, неправильном взятии материала или наличии ингибиторов реакции. Ложноположительные результаты чаще связаны с контаминацией ампликонами или нарушением организации лабораторного процесса. Для клинической интерпретации результат сопоставляют с симптомами, сроками заболевания и данными других исследований.