2) кролика
3) барана
4) человека
В классической реакции связывания комплемента в качестве источника комплемента используют лиофилизированную сыворотку морской свинки. Такая сыворотка содержит активные компоненты системы комплемента, прежде всего термолабильные белки, и характеризуется достаточно высокой и воспроизводимой гемолитической активностью. Лиофилизация облегчает хранение препарата; перед применением его восстанавливают и титруют, чтобы в каждой постановке использовалась стандартизированная доза комплемента.
Исследуемую сыворотку пациента обычно предварительно прогревают для инактивации собственного комплемента, после чего последовательно добавляют специфический антиген и комплемент морской свинки. При наличии антител образуются иммунные комплексы, которые связывают комплемент. Затем в систему вносят гемолитическую систему — эритроциты барана, сенсибилизированные антителами к ним; поскольку комплемент уже фиксирован иммунными комплексами, гемолиза не происходит.
Отсутствие гемолиза расценивают как положительную реакцию связывания комплемента, то есть как признак наличия специфических антител в исследуемой сыворотке. При отсутствии антител комплемент остается свободным и вызывает лизис сенсибилизированных эритроцитов, что соответствует отрицательной реакции. Использование сывороток других животных или человека менее приемлемо из-за вариабельности активности комплемента и риска присутствия естественных антител, способных искажать результат.
| Компонент или этап | Стандартный материал | Функция в реакции | Интерпретация |
|---|---|---|---|
| Исследуемая сыворотка | Сыворотка пациента после инактивации собственного комплемента | Источник предполагаемых специфических антител | Определяет наличие иммунного ответа к антигену |
| Специфический антиген | Стандартизированный вирусный или иной диагностический антиген | Формирует комплекс с антителами исследуемой сыворотки | Обеспечивает антигенную специфичность реакции |
| Комплемент | Лиофилизированная сыворотка морской свинки | Связывается с иммунным комплексом или участвует в гемолизе | Требует восстановления и предварительного титрования |
| Гемолитическая система | Эритроциты барана и гемолизин к ним | Индикатор наличия свободного комплемента | Позволяет визуально оценить конечный эффект реакции |
| Положительная реакция | Иммунный комплекс присутствует | Комплемент фиксирован комплексом антиген–антитело | Гемолиза нет; специфические антитела выявлены |
| Отрицательная реакция | Иммунный комплекс не образовался | Комплемент остается свободным и действует на сенсибилизированные эритроциты | Наблюдается гемолиз; специфические антитела не обнаружены |
| Контроль постановки | Контроль комплемента, гемолитической системы и антигена | Исключает неспецифический гемолиз и потерю активности реагентов | Подтверждает аналитическую достоверность результата |
Диагностическая ценность реакции повышается при исследовании парных сывороток, взятых в острой фазе заболевания и в период реконвалесценции. Значимым считается обычно четырехкратное и более увеличение титра антител. Точное дозирование комплемента принципиально важно, поскольку его избыток или недостаток может привести к ложной интерпретации гемолиза. Поэтому именно стандартизированный комплемент морской свинки является классическим реагентом для этой серологической методики.